瘦素，OB基因的产物（1,2），是一种单链蛋白激素，分子量为16kD，被认为在调节体重中发挥关键作用。它的氨基酸序列与其他蛋白质没有明显的同源性（1）。瘦素几乎只由分化的脂肪细胞产生（3-5）。它作用于中枢神经系统，特别是下丘脑，从而抑制食物摄入和刺激能量消耗。瘦素受体存在不同的选择性剪接形式，长度不同，属于细胞因子类I受体家族。它们在全身广泛分布，表明瘦素具有目前尚未w全理解的一般作用。存在一种循环形式的瘦素受体，它作为多种瘦素结合蛋白之一。除了其代谢效应外，瘦素还被证明对许多内分泌轴有强烈影响。在雄性小鼠中，它减弱了饥饿引起的LH、睾酮、甲状腺素的显著下降，以及ACTH和p质醇的增加。在雌性小鼠中，瘦素防止了饥饿引起的排卵延迟。由于OB基因突变而缺乏瘦素的Ob/ob小鼠不育。这种缺陷可以通过瘦素的给药来纠正，但通过禁食减肥则不能，这表明瘦素对生殖功能至关重要。所有这些作用至少部分可以通过瘦素对下丘脑弓状核神经元中神经肽Y（NPY）表达和分泌的抑制作用来解释。NPY是食欲的强烈刺激因子，已知它参与调节各种垂体激素，例如通过刺激生长y素抑制GH，抑制促x腺激素或刺激垂体-肾上腺轴。决定循环瘦素水平的最重要变量是体脂肪质量。在规律饮食周期的条件下，瘦素反映了脂肪组织的比例，显示出指数关系。这种构成性的瘦素合成被许多非激素和激素变量调节。在啮齿动物和人类中，过度进食、胰岛素和糖皮质激素是刺激因子。已经显示了禁食、cAMP和β-3-肾上腺素受体激动剂的抑制作用。从这些发现中可以清楚地看出，瘦素是各种代谢和内分泌反馈循环的一个组成部分。血清瘦素水平显示出适度的昼夜变化，在夜间大约凌晨2点左右达到峰值。此时的瘦素值比早上或下午早些时候测量的水平高出约30到。这种变化，连同食物摄入的影响，需要在收集血液样本时考虑。这种ELISA试剂盒适用于测定血清或血浆中的人瘦素，其他生物流体（例如唾液、尿液或母乳），以及用于研究目的的条件脂肪细胞培养基中的瘦素。

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瘦素超敏ELISA, 96孔检测原理：

瘦素ELISA（超灵敏）是一种使用两种特异性和高亲和力抗体的夹心测定法。样品中的瘦素与包被在微量滴定板上的抗体结合。在接下来的步骤中，第二特异性抗瘦素抗体依次与固定的瘦素结合。第二种抗体被生物s化，并与链霉抗生物s蛋白-过氧化物酶结合物结合。在封闭底物反应中，颜色变化将根据样品中的瘦素水平定量催化。

技术说明

必须严格按照测试协议进行测定。不能混合不同批号的试剂。使用前将所有试剂置于室温（20 - 25°C）。使用前必须通过混合和/或加热解决缓冲液中可能的沉淀问题。储存和保质期如果未开封并存放在2-8 °C并避免阳光直射，微孔板和试剂的稳定性可保持至标示的有效期。重组后的冻干试剂应存放在-20°C。避免反复冻融。组分开封后的使用期限为4周。未使用的试纸条和微孔井应与干燥剂一起密封存放在2-8 °C的密封袋中，并使用提供的框架。重组后的组分：校准品A-E和对照CTR1及CTR2必须存放在-20°C（最多4周）。再次使用时，应快速但轻柔地解冻（避免温度升高超过室温并避免过度涡旋）。最多3次冻融循环不影响测定。1X工作洗涤缓冲液WB在2-8°C下稳定4周。重组校准品A-E和对照CTR1及CTR2用稀释缓冲液DIL重组。建议将重组试剂在室温下放置15分钟，然后使用涡旋混合器c底但轻柔地（不应产生泡沫）混合。孵育在室温下孵育意味着：在20 - 25°C下孵育。底物S，稳定的四甲基联苯胺，对光敏感——存放和孵育时应避光。摇动孵育步骤应在合适的微孔板振荡器的平均旋转频率下进行。建议使用350转/分钟。由于振荡器之间的差异，可能需要优化旋转频率。摇动不足可能导致溶液混合不充分，从而导致光学密度低、变异性高和/或假值。摇动过度可能导致光学密度高和/或假值。稀释通过将提供的20倍浓缩液与蒸馏水按1:20稀释来准备所需的1X工作洗涤缓冲液WB。重组后，将对照CTR1和CTR2与稀释缓冲液DIL按相同比例（1:10）稀释，与样本相同。

典型校准曲线示例：

图1：具有多项式二次曲线拟合的示例性标准曲线。

文献参考：

1. Zhang Y, Proenca R, Maffei M, Barone M, Leopold L, Friedman JM. 1994 Positional cloning ofthe mouse obese gene and its human homologue. Nature. 372:425-432.

2. Halaas JL, Gajiwala KS, Maffei M, et al. 1995 Weight-reducing effects of the plasma proteinencoded by the obese gene. Science. 269:543-546.

3. MacDougald OA, Hwang CS, Fan H, Lane MD. 1995 Regulated expression of the obese geneproduct (leptin) in white adipose tissue and 3T3-L1 adipocytes. Proc Natl Acad Sci U S A. 92:9034-9037.

4. Rentsch J, Chiesi M. 1996 Regulation of ob gene mRNA levels in cultured adipocytes. FEBSLett. 379:55-59. 

5. Wabitsch M, Jensen PB, Blum WF, et al. 1996 Insulin and cortisol promote leptin production incultured human fat cells. Diabetes. 45:1435-1438. 

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

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