胰岛素样生长因子（IGF）I和II在调节许多细胞类型的增殖、分化和特定功能中起着关键作用（1-3）。IGF-I与生长调节素C（Sm-C）相同（4），分子量为7649道尔顿（5）。其主要调节因素是生长激素（GH）和营养（6），尽管特定组织中的其产生受到多种营养激素和其他肽类生长因子的影响。IGFs与特定的结合蛋白（IGFBP）紧密结合。目前已知有七种IGFBP（7,8,22）。IGF-I测量的一个主要问题是由于IGFBPs在测定中的干扰。在未处理的血清样本中直接测定（11）会给出错误的值，因为在测定孵化过程中IGF-I/IGFBP-3复合物的解离极其缓慢。IGF-I在各种体液和许多细胞系的条件培养基中含量较低。然而，由于IGFBPs的存在，通常数量过多，这些样本中IGF-I的测定尤其困难。IGFBP-阻断的IGF-I ELISA避免了这些问题，允许在众多样本中简单、正确、敏感地测定IGF-I，且时间花费最小。在测量前，采用了各种技术将IGF-I从其结合蛋白中物理分离，包括（a）酸性条件下的尺寸排除色谱法，（b）固相萃取，和（c）酸乙醇提取（2,12,13）。然而，这些技术要么不方便，耗时，要么给出不完整和不可重复的回收率。广泛使用的方法是非乙醇提取（13,14），由于共沉淀，只能回收70-80%的IGFBP结合IGF-I。因此，这种提取的结果是错误的低值（15）。提取去除IGFBPs不充分，并由于提取过程中样本的预稀释，导致测定灵敏度降低。此外，剩余的IGFBP仍可能在测定中产生干扰。此外，酸乙醇提取在血清或血浆以外的样本中无效（例如细胞培养基），在这些样本中IGF-I的测定已经很困难，因为IGFBPs经常大量存在。为了避免这些挑战，开发了一种不要求特殊样本准备的简单测定方法。

一种酶免疫测定法，用于定量测定人血清、血浆和细胞培养基中IGF-I的水平。仅供研究使用。不用于诊断程序。

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Igf-1 elisa, 96孔检测原理：

为了将IGF-I从IGFBPs中解离，样本必须在酸性缓冲液（样本缓冲液SB）中稀释（见图1）。然后将稀释后的样本移入测定孔中。IGF-I抗血清溶解在一个缓冲液中，该缓冲液中和酸性样本。在IGF-I抗体溶液中和样本后，存在的过量IGF-II占据结合蛋白的IGF结合位点，从而允许测定结果中的游离IGF-I。通过这种方法，IGFBPs并没有被移除，但是它们的功能，因此它们在测定中的干扰被中和。由于IGF-I抗体与IGF-II的交叉反应性极低，过量的IGF-II不会干扰抗体与IGF-I的相互作用。

IGF-I ELISA是一种所谓的夹心测定法，使用两种特异性高亲和力抗体。样本中的IGF-I与涂覆在微孔板上的抗体结合，然后第二种特异性抗IGF-I抗体转而与固定的IGF-I结合。第二种抗体是生物s标记的。随后，链霉亲和素过氧化物酶酶结合物将与之结合，在最终的底物孵化步骤中，颜色将根据样本中IGF-I的水平定量发展。IGF-I ELISA的校准品是由重组IGF-I制备的，浓度分别为2、5、15、30和50 ng/mL。

样本

1 样本类型

血清和肝素/EDTA血浆产生可比较的数值。由于抗凝剂的相对含量高，柠檬酸血浆样本中的IGF-I水平会降低。此外，细胞培养基已被评估并认定为合适的样本类型。IGF-1可能会有相当大的变化，用户必须确定更佳的稀释比例。

2 样本收集

血液样本采集应使用标准静脉穿刺。应避免溶血。

3 所需样本体积：10 ?L

4 样本稳定性

在紧闭的样本瓶中：

- 储存在20-25°C（68-77°F）：最长24小时

- 储存在-20°C：最少2年

- 冻融周期最多3次

在-20°C（-4°F）储存样本2年以上对读数没有影响。应尽量减少样本的冷冻和解冻。三次冻融周期对样本没有影响。

5 干扰

样本中的甘油三酯、d红素和血红蛋白在100 mg/mL、200 ?g/mL和1 mg/mL的浓度下不会干扰检测。然而，用户应验证使用溶血、脂血或黄疸样本。

6 样本稀释

- 稀释：1:21与样本缓冲液SB

- 在PE/PP管中移液200 ?L样本缓冲液SB（建议在处理大量样本时使用多通道移液器）；加入10 ?L样本（稀释1:21）。混合后在测定中使用2 x 20 ?L的这种稀释液。

- 注意：血清和血浆样本至少必须在样本缓冲液SB中稀释1:10，以实现样本的充分酸化。

- 根据预期的IGF-I值，样本可以在样本缓冲液SB中进行更高稀释。

- 样本稀释后的稳定性：在20-25°C（68-77°F）下最长2小时。

文献参考：

1. Baxter RC. 1986 The somatomedins: insulin-like growth factors. Adv Clin Chem.25:49-115

2. Daughaday WH, Rotwein P. 1989 Insulin-like growth factors I and II. Peptide, messenger ribonucleic acid and gene structures, serum, and tissue concentrations. Endocr Rev. 10:68-91

3. Spencer EM (Ed.) 1991 Modern Concepts of Insulin-Like Growth Factors. New York: Elsevier.

4. Klapper DG, Svoboda ME, Van Wyk JJ. 1983 Sequence analysis of somatomedin-C:confirmation of identity with insulin-like growth factor-I. Endocrinology 112:2215-2217. 

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