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张掖AF 555偶联试剂盒数据分析&FAQ

分类:新闻中心 发布时间:1970-01-01 98次浏览

FlyLink™ 染料是一系列高度水溶性的荧光染料,跨越可见光和近红...

FlyLink™ 染料是一系列高度水溶性的荧光染料,跨越可见光和近红外光谱,用于标记生物分子,特别是蛋白质和核酸。FlyLink™ 染料具有不同荧光染料的核心结构,覆盖了从UV到NIR的荧光光谱。对核心结构的创新修改使FlyLink™ 染料优于其他商业染料,具有许多创新的新特性。我们的试剂盒已经预先激活,可以直接用于偶联。FlyLink™ 标签套件是为准备FlyLink而设计的™直接来自蛋白质、肽和其他含有游离氨基的配体的缀合物

 

艾美捷AF 555偶联试剂盒

Cat #: D-AKE520/D-AKE530/D-AKE540/D-AKE560/D-AKE580

Size: 100 μg*3

Storage: Stored at -20°C for 6 months, protected from light

 

AF 555偶联试剂盒信息:

61.png

图1:FlyLink™ 555是一种明亮且可光稳定的荧光染料,可由555 nmargonlaserline激发,它是TRITC、Cy3和Alexa Fluor 555的超级替代品。它产生生物学上更特异的偶联物和无背景

图2:FlyLink™ 555光谱图

 

数据分析

1.共轭物浓度的计算:

C(mg/mL)={[A2so-(AmaxxCf)]÷1.4}x稀释因子

式中:C,实验中收集的偶联物的浓度;稀释因子:光度测量中的稀释因子;

Azso和Ama:280 nm处的吸光度和吸收波长处的吸光度(

FlyLink“”AF 488的吸收波长为490 nm);Cf:修正系数。FlyLink“”AF 488的Cf值为0.1;

1.4:gG的消光系数(mL/mg)。FlyLink“”AF 488的消光系数为70000。

2.共轭物标记度(DOL)的计算:

DOL=(AmaxMwtx稀释系数)÷(exC)

式中:Ama:在吸收波长(FlyLink“AF 488的吸收波长为490 nm)下的吸光度;Dilution factor:光度测量中的稀释因子;C:实验中收集的偶联物的浓度;Mwt:待标记样品的分子量;Ş:荧光染料的消光系数,FlyLink的消光系数”“488 AF是70000。

注:柱洗脱的缀合物可能过于浓缩,无法直接进行吸光度检测,因此需要稀释至合适的浓度(在蛋白质分析仪检测的浓度范围内)。稀释倍数(即稀释因子)需要根据初始样品质量和洗脱缀合物的总体积进行估计。如果未稀释,则稀释系数为1。

 

FAQ:

Q1:浓缩后,样品浓度仍低于2 mg/mL?

A1:如果浓缩后样品浓度仍低于2 mg/mL,则可以适当调整标记系统的体积,但最终浓度应大于1 mg/mL。FlyLink的音量™步骤1中的AF488标记溶液应为标记系统体积的10%。在步骤2中,去离子水可能不会结块,并且激活的FlyLink的体积™ 488解决方案保持不变。你也可以根据自己的实验做出适当的调整。

 

Q2:如何选择合适的纯化柱,以适应不同分子量的待标记样品

A2:纯化的柱适用于分子量为100KD至200KD的样品。如果样品的分子量大于200kD或小于100kD,则配备更合适的纯化柱尺寸。

 

Q3:待标记样品的分子量是否与FlyLink相似™ AF 488?

A3:如果样品的分子量与FlyLink相似™ AF 488,在完成与本说明书对应的标记步骤后,加入30µL 0.5µM NH4Cl,并在37°C下孵育10分钟,以猝灭freeFlyLink™AF 488,而不需要纯化步骤。

 

https://www.amyjet.com/products/D-AKE530-3.shtml

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