腺相关病毒（AAV）源自有缺陷的细小病毒，它们依赖其他病毒（如腺病毒和疱疹病毒）提供的必需辅助功能，以实现高效的病毒复制和传播。AAV与任何已知疾病没病因学关联，并且已成功用于在多种组织中建立高效且长期的基因表达，而不会引起显著的细胞免疫反应或毒性。

AAV具有单链DNA基因组，长度约为4.7 kb。所有已鉴定的AAV血清型都具有三个关键特征，包括两个AAV末端重复序列（ITR）、一个rep区和一个cap区。ITR能够形成T形二级结构，是AAV复制、包装、整合和拯救所需的唯1顺式元件。rep区编码四种重叠蛋白，分别命名为Rep78、Rep68、Rep52和Rep40，这是根据蛋白的表观分子质量来命名的。除了在AAV复制中的明确作用外，Rep蛋白还调节AAV的包装和特异性整合。cap区编码三种结构蛋白：VP1、VP2和VP3。这三种蛋白共享相同的阅读框。

Cell Biolabs的AAV无辅助病毒系统允许在不使用辅助病毒的情况下生产具有感染性的重组人腺相关病毒（rAAV）颗粒（见图2）。在AAV无辅助病毒系统中，生产感染性AAV颗粒所需的大多数腺病毒基因产物由共转染到细胞中的质粒pHelper提供（即E2A、E4和VA RNA基因）。其余的腺病毒基因产物由293宿主细胞提供，这些细胞稳定表达腺病毒E1基因。通过消除对活辅助病毒的需求，AAV无辅助病毒系统提供了一个更安全、更便捷的基因传递系统。在AAV无辅助病毒系统中，rep和cap基因已从含有AAV-2 ITR的病毒载体中移除，并在质粒pAAV-RC上以反式提供。移除AAV的rep和cap基因使得可以在病毒基因组中插入感兴趣的基因。Cell Biolabs的AAV无辅助病毒系统可以容纳长达3 kb的插入片段。

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结果示例

以下图表展示了使用Cell Biolabs的AAV无辅助病毒系统的典型结果。以下数据仅供参考。

图5：AAV2-GFP的生产和转导

通过共转染293AAV细胞（货号AAV-100）与pAAV-GFP（货号AAV-400）、pAAV-RC2和pHelper来生产AAV2-GFP。293AD细胞（货号AD-100）用AAV2-GFP病毒上清感染48小时。左上：转染前的293AAV细胞（10倍）；右上：转染后48小时的293AAV细胞（10倍）；左下：转染后48小时293AAV细胞中的GFP表达（10倍）。右下：转导后48小时293AD细胞中的GFP表达（20倍）。

文献参考：

1. Auricchio, A., Hildinger, M., O'Connor, E., Gao, G. P. and Wilson, J. M. (2001) Hum Gene Ther 12:71–6.

2. Brument, N., Morenweiser, R., Blouin, V., Toublanc, E., Raimbaud, I. et al. (2002) Mol Ther 6:678–86.

3. Clark, K., Liu, X., McGrath, J., and Johnson, P. (1999) Hum. Gene Ther., 10, 1031-1039.

4. Graham, F. L., Smiley, J., Russell, W. C. and Nairn, R. (1977) J Gen Virol 36:59-74.

5. Grimm, D. and Kleinschmidt, J. A. (1999) Hum Gene Ther 10:2445-50.

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