（一）核心技术参数
| 参数 | 指标 |
|---|---|
| 货号 | 27811（RUO） |
| 检测范围 | 17.2-1,100 pg/mL |
| 灵敏度 | 3.2 pg/mL |
| 样本类型 | 人脑脊液（CSF） |
| 交叉反应性 | 仅识别人源 Tau 蛋白，与其他物种无显著交叉反应 |
| 检测时间 | 约 16 小时（含过夜孵育） |
| 稳定性 | 2-8℃储存至少 6 个月，避免反复冻融 |
（二）性能验证数据
线性关系：通过系列稀释含 500 pg/mL 总 hTau 的标准品，获得斜率 0.988、相关系数 R²=0.999 的标准曲线，显示优异的线性关系。
回收率测试：在 CSF 中添加 200 pg/mL 总 hTau 标准品，回收率范围 95%-105%（均值 101%），证明检测准确性。
精密度：板内变异系数（CV）<7%，板间 CV<9%，确保结果重复性。
（三）技术优势解析
双抗体夹心技术：试剂盒采用预包被的抗 hTau 捕获抗体和生物素化检测抗体，特异性识别 Tau 蛋白的完整构象，覆盖所有磷酸化及非磷酸化形式，避免与其他神经丝蛋白（如 NF-L、NF-H）的交叉反应。
高灵敏度设计：检测下限达 3.2 pg/mL，可有效区分健康人群（CSF 总 hTau 约 150-300 pg/mL）与 AD 患者（CSF 总 hTau>450 pg/mL）的微小变化。
标准化流程：12×8 孔可拆卸板条设计，支持单次检测 8-96 个样本，适配不同实验规模需求；全程操作仅需 16 小时（含过夜孵育），减少实验耗时。
样本兼容性：专为人 CSF 样本优化，避免血液成分干扰，同时兼容大鼠、猕猴等动物模型样本，为基础研究提供便利。
三、检测原理与实验流程
（一）检测原理
试剂盒基于双抗体夹心 ELISA 技术，具体步骤如下：
捕获阶段：预包被于微孔板的抗 hTau 抗体特异性结合样本中的 Tau 分子；
信号放大：生物素化检测抗体与捕获的 Tau 结合，随后加入链霉亲和素 - 辣根过氧化物酶（HRP）复合物，形成 “抗体 - Tau - 生物素抗体 - HRP” 复合物；
显色反应：加入 TMB 底物后，HRP 催化底物显色，颜色深浅与样本中总 hTau 浓度成正比；
定量分析：通过酶标仪检测 450 nm 吸光度，根据标准曲线计算样本中总 hTau 含量。
（二）实验流程概述
样本预处理：
CSF 采集：采用腰椎穿刺获取 CSF，离心（3,000 rpm，10 分钟）去除细胞碎片，避免溶血；
样本保存：CSF 可在 - 80℃保存，避免反复冻融；
稀释要求：样本需按 1:100 稀释后加入孔板，确保检测在标准曲线范围内。
加样与孵育：
标准品和样本按 1:100 稀释后加入孔板，4℃过夜孵育；
依次加入生物素化抗体（37℃孵育 30 分钟）和 HRP 复合物（室温孵育 30 分钟），每次孵育后需彻底洗涤以去除未结合成分。
显色与检测：
TMB 底物避光显色 15-20 分钟，草酸终止反应；
酶标仪读取 450 nm 吸光度，扣除 540 nm 背景值后计算结果。
（三）关键注意事项
样本处理：
溶血样本可能释放内源性过氧化物酶，干扰检测结果；
脂血样本需超速离心（10,000 rpm，30 分钟）去除脂质颗粒。
温育条件：严格控制孵育温度和时间，避免温度波动影响抗体 - 抗原结合效率。
洗涤步骤：使用试剂盒配套洗涤液，每孔洗涤 5 次，每次浸泡 1 分钟，确保彻底去除未结合成分。
安全防护：TMB 底物具有潜在致癌性，需戴手套操作；终止液草酸需避免接触皮肤与黏膜。
四、应用领域与研究价值
（一）临床诊断与监测
阿尔茨海默病（AD）：
CSF 总 hTau 水平与神经纤维缠结负荷及认知功能下降程度显著相关，结合 Aβ42/Aβ40 比率可提高 AD 诊断特异性（AUC=0.89）；
动态监测总 hTau 水平可评估疾病进展及药物疗效，如抗 Tau 抗体治疗临床试验中，总 hTau 下降与临床症状改善呈正相关。
其他 tauopathies：
额颞叶痴呆（FTD）：CSF 总 hTau 水平显著低于 AD，结合磷酸化 Tau（pTau）可辅助鉴别诊断；
进行性核上性麻痹（PSP）：CSF 总 hTau 水平升高，与疾病严重程度及生存期相关。
药物研发评价：
评估抗 Tau 药物（如 Tau 聚集抑制剂）的药效，监测治疗过程中总 hTau 水平的动态变化；
在血脑屏障通透性研究中，结合血浆总 hTau 检测可评估药物脑内递送效率。
（二）基础研究应用
神经损伤机制研究：
通过检测总 hTau 生成量，解析不同损伤模型（如氧化应激、缺血再灌注）中轴突损伤的分子机制；
研究 Tau 蛋白与其他神经退行性标志物（如 α-synuclein、TDP-43）的相互作用网络。
动物模型研究：
构建 hTau 转基因小鼠模型，研究 Tau 聚集与神经退行性变的因果关系；
模拟 AD 病理过程中，分析总 hTau 水平变化对突触可塑性及线粒体功能的影响。
新型生物标志物开发：
结合质谱技术，鉴定 Tau 蛋白的翻译后修饰（如多巴胺化、泛素化），探索其与疾病进展的关联；
开发血浆总 hTau 检测方法，推动非侵入性 AD 筛查技术的临床转化。
五、质量控制与结果解读
（一）室内质量控制
标准品验证：每次实验需包含标准品曲线，确保标准品吸光度值在试剂盒提供的范围内。
阴性对照：使用试剂盒提供的阴性对照 CSF，其 OD 值应低于临界值（通常为 0.1）。
重复性检测：对同一样本进行重复检测，确保 CV<10%，否则需重新实验。
（二）结果解读要点
生理波动：CSF 总 hTau 水平受年龄、性别、肾功能等因素影响，需结合临床背景综合分析。例如，老年人 CSF 总 hTau 水平轻度升高可能与生理性神经退变相关。
疾病特异性：总 hTau 升高可见于多种神经退行性疾病，需结合其他指标（如 Aβ42、pTau）及影像学结果进行鉴别诊断。例如，AD 患者表现为 CSF 总 hTau 升高伴 Aβ42 降低，而 FTD 患者总 hTau 水平正常或轻度升高。
动态监测：单次检测结果需结合临床症状及其他标志物（如血浆 GFAP、CSF pTau181）进行动态评估。例如，在抗 Tau 药物临床试验中，总 hTau 水平下降需持续 6 个月以上方可视为治疗有效。
六、总结与展望
IBL international 总 hTau 蛋白 ELISA 试剂盒通过精准的双抗体夹心技术，为神经退行性疾病研究提供了可靠的定量工具。其高灵敏度、特异性及广泛的临床适用性，使其在 AD 诊断、病情监测及药物研发中具有重要价值。尽管与 SIMOA 等超灵敏技术相比，ELISA 在血浆检测中的灵敏度仍有局限，但其在 CSF 研究中的稳定性和经济性使其成为实验室常规检测的优选方案。
未来，随着 Tau 靶向治疗的不断发展，该试剂盒将在临床前药效评估及个体化治疗监测中发挥更大作用。例如，结合多巴胺化修饰等新型标志物，可进一步解析 Tau 蛋白的病理机制；通过多组学技术整合总 hTau 与其他生物标志物，有望建立更精准的 AD 预测模型。IBL 试剂盒的持续优化（如开发血浆检测版本）将推动神经退行性疾病研究向非侵入性、高通量方向发展，为早期干预和精准医疗提供有力支持。
参考文献
- IBL America. Total Tau (Human) ELISA Kit Product Manual. 2025.
- Hampel H, et al. Total and phosphorylated tau protein as biological markers of Alzheimer's disease. Exp Gerontol. 2010.
- Liu G, et al. Tau accumulation triggers STAT1-dependent memory deficits by suppressing NMDA receptor expression. EMBO Rep. 2019.
- De Meyer S, et al. Comparison of ELISA- and SIMOA-based quantification of plasma Aβ ratios for early detection of cerebral amyloidosis. Alzheimer's Res Ther. 2020.
- Wang C, et al. Quantitative chemoproteomics reveals dopamine’s protective modification of Tau. Nat Chem Biol. 2025.
- UmanDiagnostics. NF-light® ELISA Product Manual. 2025.
- Cleveland Clinic. Neurofilament Light Chain Fact Sheet. 2024.
- News-Medical. What are neurofilament light (NfL) intermediate filament proteins? 2024.
- National Science and Technology Library. Multi-center validation study of NF-light ELISA. 2024.
