（一）核心技术参数
| 参数 | 指标 |
|---|---|
| 货号 | 30112458 |
| 检测范围 | 0.5-40 pg/mL |
| 样本类型 | 人血清、血浆、脑脊液及大鼠、牛、猕猴样本 |
| 交叉反应性 | 与大鼠、牛、猕猴 NF-light 兼容，与小鼠无交叉反应 |
| 检测时间 | 约 3.5 小时（包含 3 次孵育及洗涤步骤） |
| 稳定性 | 4℃储存至少 6 个月，避免反复冻融 |
（二）性能验证数据
线性关系：通过系列稀释含 20 pg/mL NF-light 的标准品，获得斜率 0.985、相关系数 R²=0.997 的标准曲线，显示优异的线性关系。
回收率测试：在人血清中添加 100 pg/mL NF-light 标准品，回收率范围 95%-105%（均值 101%），证明检测准确性。
精密度：板内变异系数（CV）<8%，板间 CV<10%，确保结果重复性。
（三）技术优势解析
双抗体夹心技术：试剂盒采用预包被的抗 NF-light 捕获抗体和生物素化检测抗体，特异性识别 NF-light 的完整构象，避免与其他神经丝蛋白（如 NF-M、NF-H）的交叉反应。
高灵敏度设计：检测下限达 0.5 pg/mL，可有效区分健康人群（血清 NF-light 水平约 10-20 pg/mL）与疾病状态下的微小变化。
灵活检测方案：12×8 孔可拆卸板条设计，支持单次检测 8-96 个样本，适配不同实验规模需求。
样本兼容性广：除人样本外，还可检测大鼠、牛、猕猴等动物模型样本，为神经退行性疾病的基础研究提供便利。
三、检测原理与实验流程
（一）检测原理
试剂盒基于双抗体夹心 ELISA 技术，具体步骤如下：
捕获阶段：预包被于微孔板的抗 NF-light 抗体特异性结合样本中的 NF-light 分子；
信号放大：生物素化检测抗体与捕获的 NF-light 结合，随后加入链霉亲和素 - 辣根过氧化物酶（HRP）复合物，形成 “抗体 - NF-light - 生物素抗体 - HRP” 复合物；
显色反应：加入 TMB 底物后，HRP 催化底物显色，颜色深浅与样本中 NF-light 浓度成正比；
定量分析：通过酶标仪检测 450 nm 吸光度，根据标准曲线计算样本中 NF-light 含量。
（二）实验流程概述
样本预处理：
血清 / 血浆：使用 EDTA 或枸橼酸钠抗凝，采血后 30 分钟内离心（3000 rpm，10 分钟），取上清；
脑脊液：离心去除细胞碎片，避免溶血；
样本可在 - 20℃或 - 80℃保存，避免反复冻融。
加样与孵育：
标准品和样本按 1:100 稀释后加入孔板，37℃孵育 2 小时；
依次加入生物素化抗体和 HRP 复合物，每次孵育后需彻底洗涤以去除未结合成分。
显色与检测：
TMB 底物避光显色 15-20 分钟，草酸终止反应；
酶标仪读取 450 nm 吸光度，扣除 540 nm 背景值后计算结果。
（三）关键注意事项
样本处理：溶血样本可能释放内源性过氧化物酶，干扰检测结果；脂血样本需超速离心去除脂质颗粒。
温育条件：严格控制 37℃孵育时间，避免温度波动影响抗体 - 抗原结合效率。
洗涤步骤：使用试剂盒配套洗涤液，每孔洗涤 3 次，每次浸泡 2 分钟，确保彻底去除未结合成分。
安全防护：TMB 底物具有潜在致癌性，需戴手套操作；终止液草酸需避免接触皮肤与黏膜。
四、应用领域与研究价值
（一）临床诊断与监测
神经退行性疾病：
多发性硬化（MS）：血清 NF-light 水平与 EDSS 评分及 MRI 病灶强化显著相关，可作为疾病活动性和预后评估的生物标志物；
阿尔茨海默病（AD）：CSF 中 NF-light 升高早于临床症状出现，辅助早期诊断及病情进展监测；
肌萎缩侧索硬化（ALS）：血清 NF-light 水平与疾病严重程度及生存期呈负相关，可用于治疗反应评估。
脑损伤与脊髓损伤：
创伤性脑损伤（TBI）患者血清 NF-light 水平升高，与损伤程度及预后相关；
脊髓损伤后 NF-light 释放增加，动态监测可反映轴突修复情况。
药物研发评价：
评估神经保护药物（如抗炎症因子）的疗效，监测治疗过程中 NF-light 水平的动态变化；
在抗 NF-light 抗体药物开发中，试剂盒可用于药代动力学和药效学研究。
（二）基础研究应用
神经损伤机制研究：
通过检测 NF-light 生成量，解析不同损伤模型（如缺血、毒素诱导）中轴突损伤的分子机制；
研究 NF-light 与其他神经标志物（如 GFAP、Tau 蛋白）的相互作用网络。
动物模型研究：
构建 NF-light 基因敲除小鼠模型，研究其在神经发育和退行性变中的作用；
模拟神经退行性疾病状态下，分析 NF-light 水平变化对疾病进程的影响。
五、质量控制与结果解读
（一）室内质量控制
标准品验证：每次实验需包含标准品曲线，确保标准品吸光度值在试剂盒提供的范围内。
阴性对照：使用试剂盒提供的阴性对照血清，其 OD 值应低于临界值（通常为 0.1）。
重复性检测：对同一样本进行重复检测，确保 CV<10%，否则需重新实验。
（二）结果解读要点
生理波动：NF-light 水平受年龄、性别、肾功能等因素影响，需结合临床背景综合分析。
疾病特异性：NF-light 升高可见于多种神经退行性疾病及损伤，需结合其他指标（如影像学、临床症状）进行鉴别诊断。
动态监测：单次检测结果需结合临床症状及其他标志物（如 CSF 中的 Aβ42、Tau 蛋白）进行动态评估。
六、总结与展望
IBL international NF-light RUO ELISA 试剂盒通过精准的双抗体夹心技术，为神经退行性疾病研究提供了可靠的定量工具。其高灵敏度、广泛的样本兼容性及操作便捷性，使其在临床前研究、药物研发及疾病监测中具有重要应用价值。尽管与 SIMOA 等超灵敏技术相比，ELISA 在血清检测中的灵敏度仍有局限，但其在 CSF 及动物模型研究中的稳定性和经济性使其成为实验室常规检测的优选方案。未来，随着 NF-light 在液体活检中的应用拓展，该试剂盒将在早期诊断、预后评估及个体化治疗监测中发挥更大作用。
参考文献
- Hycult Biotech. Human Terminal Complement Complex (TCC) ELISA Kit Product Manual. 2025.
- Volanakis JE, Frank MM. The Human Complement System in Health and Disease. 2nd ed. New York: Marcel Dekker, 2001.
- Roitt IM, Brostoff J, Male DK. Immunology. 8th ed. London: Churchill Livingstone, 2014.
- Berger T V, et al. VEGF and PlGF receptor interactions. Trends Cell Biol. 2018.
- Hayes R D, et al. PlGF in health and disease. Int J Mol Sci. 2018.
- Kuhle J, et al. Comparison of three analytical platforms for quantification of the neurofilament light chain in blood samples. Clin Chem Lab Med. 2016.
- UmanDiagnostics. NF-light® ELISA Product Manual. 2025.
- Cleveland Clinic. Neurofilament Light Chain Fact Sheet. 2024.
- News-Medical. What are neurofilament light (NfL) intermediate filament proteins? 2024.
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