瘦素，ob基因的产物（1,2），是一种分子量为16 kD的单链蛋白激素。它被认为在体重调节中发挥关键作用。它的氨基酸序列与其他蛋白质没有显著的同源性（1）。瘦素几乎只由分化的脂肪细胞产生。它作用于中枢神经系统，特别是下丘脑，抑制食物摄入并刺激能量消耗。瘦素受体——不同长度的替代剪接形式——属于细胞因子类I受体家族。它们在全身广泛分布，表明瘦素具有目前尚未w全理解的一般作用。存在一种循环形式的瘦素受体，它作为多种瘦素结合蛋白之一。除了其代谢效应外，瘦素还被证明影响多个内分泌轴。在雄性小鼠中，它减弱了饥饿引起的LH、睾酮、甲状腺素的显著下降，以及ACTH和p质醇的增加。在雌性小鼠中，瘦素防止了饥饿引起的排卵延迟。由于ob基因突变而缺乏瘦素的Ob/ob小鼠不育。这种缺陷可以通过瘦素的给药来纠正，但通过禁食减肥则不能，这表明瘦素对生殖功能至关重要。所有这些作用至少部分可以通过瘦素对下丘脑弓状核神经元中神经肽Y（NPY）表达和分泌的抑制作用来解释。NPY是食欲的强烈刺激因子，已知它参与调节各种垂体激素，例如通过刺激生长y素抑制GH，抑制促x腺激素或刺激垂体-肾上腺轴。决定循环瘦素水平的最重要变量是体脂肪质量。在规律饮食周期的条件下，瘦素反映了脂肪组织的比例，显示出指数关系。这种构成性的瘦素合成被许多非激素和激素变量调节。在啮齿动物和人类中，过度进食、高脂饮食、胰岛素和糖皮质激素是刺激因子。已经显示了禁食、cAMP和β-3-肾上腺素受体激动剂的抑制作用。从这些发现中可以清楚地看出，瘦素是各种代谢和内分泌反馈循环的一个组成部分）。

瘦素（小鼠/大鼠）ELISA是一种酶免疫测定试剂盒，适用于定量测定小鼠和大鼠血清或血浆中的瘦素，用于科学目的。仅供研究使用。不用于诊断程序。

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO销售产品小鼠/大鼠瘦素EIA(96孔)。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

小鼠/大鼠瘦素EIA(96孔)检测原理：

瘦素（小鼠/大鼠）ELISA是一种所谓的夹心法。它利用两种不同的特异性高亲和力多克隆抗体来治疗这种蛋白质。样本中的瘦素与固定化抗体定量结合。在接下来的步骤中，生物s化抗体又与瘦素结合。洗涤后，加入链霉抗生物s蛋白-过氧化物酶偶联物，其对生物s具有高度特异性，并与抗体的生物s结合。随后，过氧化物酶催化酶反应，导致蓝色。蓝色的强度取决于样品的瘦素含量。通过加入终止溶液来终止反应，并通过测量吸收来量化颜色强度。

技术说明

1 储存条件

收到试剂盒后，在其有效期内，将其存放在2-8°C。重组后的冻干试剂应存放在-20°C。避免反复冻融。

2 储存寿命

组分开封后的使用期限保证为4周。未使用的试纸条和微孔板应与干燥剂一起密封存放在2-8°C的夹锁袋中，并使用提供的框架。重组后的组分应存放在-20°C（或更冷）。再次使用时，应快速但轻柔地解冻（避免温度升高超过室温并避免过度涡旋）。只能冷冻一次！1:20稀释的工作洗涤缓冲液WP在2-8°C下稳定4周。

3 试剂准备

使用前将所有试剂置于室温（20 - 25°C）。缓冲液中的沉淀在使用前必须通过混合和/或加热溶解。不能混合不同批次的试剂。

4 重组

标准品A – G和对照KS用稀释缓冲液VP重组。建议将重组后的试剂在室温下放置15分钟，然后使用涡旋混合器c底但轻柔地（不应产生泡沫）混合。只能冷冻一次！

5 稀释

重组后，将对照KS与稀释缓冲液VP按相同比例（1:5）稀释，与样本相同。所需体积的工作洗涤缓冲液WP是通过将20倍浓缩液与蒸馏水按1:20稀释来准备的。稀释1:20的洗涤缓冲液WP稳定4周。

6 测定程序

进行测定时，空白、标准品A-G、对照KS和样本应尽可能快地（例如，<15分钟）移液。为避免由于孵育时间差异导致的失真，抗体结合物AK、酶结合物EK以及随后的底物溶液S应与样本以相同的顺序和相同的时间间隔添加到板中。停止溶液SL应与底物溶液以相同的顺序添加到板中。所有测定（空白、标准品A-G、对照KS和样本）应进行双重测定。为获得更佳结果，建议准确移液并遵守操作规程。

7 孵育

室温孵育意味着在20 – 25°C下孵育。底物溶液S，稳定的四甲基联苯胺，对光敏感；存放和孵育时应避光。

8 摇动

孵育步骤应在特别适合的微孔板振荡器的平均旋转频率下进行。建议将振荡器设置为350转/分钟。由于振荡器之间的技术差异，可能需要调整旋转频率。摇动不足可能导致溶液混合不充分和光学密度低、变异性高和/或假值；摇动过度可能导致光学密度高和/或假值。

9 洗涤

正确的洗涤对于测定的可靠和性能至关重要。不c底的洗涤会对测定结果产生不利影响。可能的后果是测量的光学密度出现不可控的、非特异性的变化，可能导致假结果。高背景值或高变异性等效应可能表明洗涤问题。所有洗涤必须使用提供的稀释至工作浓度的洗涤缓冲液进行。每个洗涤周期和每个孔的洗涤体积至少为300 ?L。如果手动洗涤，可通过多步装置、多通道移液器或喷瓶分配洗涤缓冲液。将板洗涤至生物危害垃圾桶，然后每个孔加入300?L洗涤缓冲液WP，倒出内容物，并在吸收性组织上拍打。重复此步骤2次，共进行3次洗涤。

典型标准曲线示例

以下数据仅用于演示，不能代替分析时生成的数据。

图1：具有多项式二次曲线拟合的示例性标准曲线。

文献参考：

1. Zhang Y, Proenca R, Maffei M, Barone M, Leopold L, Friedman JM. 1994 Positional cloning of themouse obese gene and its human homologue. Nature. 372:425-432.

2. Halaas JL, Gajiwala KS, Maffei M, et al. 1995 Weight-reducing effects of the plasma protein encodedby the obese gene. Science. 269:543-546.

3. MacDougald OA, Hwang CS, Fan H, Lane MD. 1995 Regulated expression of the obese geneproduct (leptin) in white adipose tissue and 3T3-L1 adipocytes. Proc Natl Acad Sci U S A. 92:9034-9037.

4. Rentsch J, Chiesi M. 1996 Regulation of ob gene mRNA levels in cultured adipocytes. FEBS Lett.379:55-59.

5. Wabitsch M, Jensen PB, Blum WF, et al. 1996 Insulin and cortisol promote leptin production incultured human fat cells. Diabetes. 45:1435-1438.

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

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