胰岛素样生长因子（IGF）-I和--II在调节多种组织类型的增殖和分化中起着关键作用1-3。IGF-I，也称为生长调节素C4，分子量为7.5 kDa5。其表达主要由生长激素和营养6调节。已知有几种激素和肽因子影响不同组织中IGF-II的合成。IGFs的生物利用度由特定的结合蛋白（IGFBP）调节。除了高亲和力的胰岛素样生长因子结合蛋白1-6，IGFs也由IGFBP相关蛋白7,8,22结合。这些结合蛋白与IGF-I和IGF-II结合的亲和力相同，或偏好IGF-II9,10。未经预处理直接测量血清样本中的IGFs会导致错误的值。由于在测定孵化过程中IGF/IGFBP复合物的解离极其缓慢，只有部分IGF-II能与抗体结合并被检测到。因此，可以应用各种技术在测量前将IGF-II从其结合蛋白中物理分离，包括（a）酸性条件下的尺寸排除色谱法，（b）固相萃取和（c）酸-乙醇提取2,12,13。然而，这些技术要么不方便，耗时，要么给出不完整和不可重复的回收率。这种测定方法简单、快速，其结果不依赖于样本的结合蛋白浓度。它基于所用抗体对IGF-II的高特异性。与IGF-I几乎没有交叉反应。这允许通过酸化和用IGF-I阻断游离结合蛋白来分离IGF-II。因此，内源性IGF-II在溶液中是自由的。

人血清、血浆、尿液、唾液和细胞培养上清液中IGF-II的测定。仅供研究使用。不用于诊断程序

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Igf-2 elisa, 96孔检测原理：

IGF-II的酶联免疫吸附测定（ELISA）是一种夹心测定法。它利用两种特异性和高亲和力的抗体来检测这种蛋白质。种抗体固定在微孔板上，加入的第二种生物s标记的抗体与样本中的IGF-II结合。随后，链霉亲和素过氧化物酶酶结合物与复合物结合。在最后的底物反应中，颜色的变化与样本中IGF-II的水平呈定量关系。IGF-II-IGFBP复合物通过在酸性缓冲液中稀释而解离。IGFBPs被过量的IGF-I阻断，从而允许游离IGF-II的测量。使用这种方法，IGFBPs并没有被移除，但是它们的功能，因此它们在测定中的干扰被中和。由于IGF-II抗体与IGF-I的交叉反应性很低，过量的IGF-I不会干扰种抗体与IGF-II的相互作用。

1 样本类型

血清和血浆

血清和肝素/EDTA血浆的检测结果具有可比性。适用于血清样本以及肝素、EDTA和柠檬酸血浆样本。必须考虑抗凝剂可能对样本造成的稀释效应。此外，适用的样本还包括：尿液、唾液（浓度较低，至少需稀释1:10）、和细胞培养基（含5%胎牛血清，至少需稀释1:5）。其他体液或细胞培养上清中的IGF-II浓度可能与血清值有显著差异。

2 样本采集

应使用标准静脉采血法进行血液样本采集。避免使用溶血样本。

3 所需样本体积

10 ?L

4 样本稳定性

应按照一般推荐的方法尽快处理样本，并尽快冷藏。如果样本采集和测定之间有较长时间间隔，应将未稀释的样本储存在-20°C或更低温度的紧密封闭塑料管中。避免血清/血浆的反复冻融（如果需要，请分装），尽管在实验中发现IGF-II水平在几次冻融周期后不受影响。

5 干扰

样本中的甘油三酯、胆红s和血红蛋白在分别达到100mg/mL、200?g/mL或1mg/mL的浓度时不会干扰检测。然而，应由用户验证使用溶血、脂血或黄疸样本。

6 样本稀释

用样本缓冲液SB1进行1:404稀释 - 单步稀释：在PE/PP管中加入2015 ?L样本缓冲液SB（建议使用多通道移液器进行大量系列操作）。随后加入5 ?L样本（稀释1:404）。孵育至少15分钟，最多2小时。用于测定的体积为50 ?L。

两步稀释：因为使用10 ?L样本可以提高移液准确性，也可以使用两步稀释。首先，在PE/PP管中加入1000 ?L样本缓冲液SB，然后加入10 ?L样本（稀释1:101）。将50 ?L这种溶液与150 ?L样本缓冲液SB混合（稀释1:404）。孵育至少15分钟，最多2小时。用于测定的体积为50 ?L。

文献参考：

1) Baxter RC. 1986 The somatomedins: insulin-like growth factors. Adv Clin Chem.25:49-115

2) Daughaday WH, Rotwein P. 1989 Insulin-like growth factors I and II. Peptide, messenger ribonucleic acidand gene structures, serum, and tissue concentrations. Endocr Rev. 10:68-91

3) Spencer EM (Ed.) 1991 Modern Concepts of Insulin-Like Growth Factors. New York: Elsevier.

4) Klapper DG, Svoboda ME, Van Wyk JJ. 1983 Sequence analysis of somatomedin-C: confirmation ofidentity with insulin-like growth factor-I. Endocrinology. 112:2215-2217.

5)Rinderknecht E, Humbel RE. 1978 The amino acid sequence of human insulin-like growth factor I and itsstructural homology with proinsulin. J Biol Chem. 253:2769-2276.

6) Clemmons DR, Van Wyk JJ. 1984 Factors controlling blood concentration of somatomedin C. ClinEndocrinol Metab. 13:113-143.

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

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