逆转录病毒基因转移是一种高效地将稳定、可遗传的遗传物质引入任何分裂细胞类型基因组的技术。基于莫洛尼小鼠白血病病毒（MMLV）的载体，对于大多数有丝分裂细胞类型，转导效率可达到超过90%，并且通过改变感染复数可以轻松控制每个细胞的拷贝数。

当前的逆转录病毒基因转移技术基于包装细胞系和逆转录病毒表达载体的协调设计。包装细胞系通常包含病毒的gag、pol和env基因，这些基因对于病毒颗粒的形成和复制是必需的，并且它们被稳定整合到包装细胞的基因组中。逆转录病毒表达载体提供包装信号ψ+、转录和处理元件以及目标基因。插入片段长达6.5 kb可以被高效包装。将逆转录病毒载体转染到包装细胞系中可以产生高滴度、复制缺陷型病毒。

由包装细胞系表达的病毒env基因编码包膜蛋白，该蛋白决定了包装病毒的感染范围（嗜性）。病毒包膜根据用于进入宿主细胞的受体进行分类（见表1）。嗜性病毒只能识别小鼠和大鼠细胞上的一种受体。两性病毒可以识别广泛哺乳动物细胞类型上的一种受体。泛嗜性病毒，例如用囊泡性口炎病毒（VSV-G）包膜糖蛋白假型化的逆转录病毒，可以感染哺乳动物和非哺乳动物细胞。与其他病毒包膜蛋白不同，VSV-G通过脂质结合和质膜融合介导病毒进入。然而，VSV-G包膜蛋白的稳定表达是有毒的，因此泛嗜性病毒通常是通过瞬时共转染逆转录病毒表达载体和pVSV-G到仅表达病毒gag和pol基因的泛嗜性包装细胞系中产生的。

传统的基于NIH-3T3的逆转录病毒包装细胞系和Phoenix包装细胞系由于包装细胞中逆转录病毒结构蛋白（gag、pol、env）的表达水平较低，导致病毒产量低且稳定性有限。基于293T细胞系的Platinum包装细胞系是一种高效的逆转录病毒包装细胞系，通过使用带有EF1α启动子的新型包装构建体生成，以确保更长的稳定性和高产量的逆转录病毒结构蛋白表达（gag、pol、env）。在药物选择的条件下，Platinum细胞可以保持良好的状态至少4个月，并且通过瞬时转染可以产生平均滴度为1×10?感染单位/mL的逆转录病毒。此外，由于仅使用病毒结构基因的编码序列，避免了任何不必要的逆转录病毒序列，因此几乎不存在复制型逆转录病毒（RCR）。

Cell Biolabs的嗜性Platinum逆转录病毒表达系统提供了一种简单的方法，用于高效生成无RCR的嗜性逆转录病毒。该试剂盒包括Plat-E包装细胞、pMXs-Puro、pMXs-Neo逆转录病毒表达载体和pMXs-GFP对照载体。

作为Cell Biolabs全国总代理，艾美捷科技强烈推荐Cell Biolabs销售产品铂逆转录病毒表达系统，包装细胞系。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

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4. VPK-302：Platinum逆转录病毒表达系统（泛嗜性）  

试剂盒组成（干冰运输）

1. Plat-E逆转录病毒包装细胞系（部件编号RV-101）：一支无菌管——1.0 mL，细胞浓度>3×10?个/mL，含20%胎牛血清和10% DMSO的DMEM培养基。  

2. pMXs-Puro（部件编号RTV-012）：一支无菌管——10 ?g的pMXs-Puro质粒，浓度为0.25 ?g/?L，溶于TE缓冲液。  

3. pMXs-Neo（部件编号RTV-011）：一支无菌管——10 ?g的pMXs-Neo质粒，浓度为0.25 ?g/?L，溶于TE缓冲液。  

4. pMXs-GFP（部件编号RTV-050）：一支无菌管——10 ?g的pMXs-GFP质粒，浓度为0.25 ?g/?L，溶于TE缓冲液。  

未提供材料

1. Plat-E培养基：DMEM，10%胎牛血清（FBS），1 ?g/mL嘌呤霉素，10 ?g/mL杀稻瘟菌素，青霉素和链霉素。  

2. Platinum细胞冻存培养基：70% DMEM，20% FBS，10% DMSO。  

3. 转染试剂。  

4. 质粒提取试剂盒。  

保存方法

将Platinum逆转录病毒包装细胞系保存在液氮中，质粒保存在-20℃。

**注意**：为获得更佳结果，请在收到细胞后立即开始培养。如果无法立即进行，可将细胞保存在-80℃，直到开始培养。后续培养的细胞应长期保存在液氮中。

pMXs-Puro和pMXs-Neo

Cell Biolabs的pMXs逆转录病毒载体基于莫洛尼小鼠白血病病毒（MMLV）。该载体提供病毒包装信号、转录和处理元件以及用于目标基因克隆的多克隆位点（MCS）。载体包含氨苄青霉素抗性基因，用于细菌中的扩增和抗生素选择（见图1）。

图1. pMXs-Puro和pMXs-Neo逆转录病毒载体的示意图。

文献参考：

1. Miller, A. D. & Baltimore, C. (1986) Mol. Cell. Biol. 6:2895–2902.

2. Mann, R., Mulligan, R. C. and Baltimore, D. (1983) Cell 33:153–159.

3. Morita, S., Kojim, T., and Kitamura, T. (2000) Gene Therapy 7: 1063-1066.

4. Takahashi, K. and Yamanaka, S. (2006) Cell 126: 663-676

Cell Biolabs公司位于美国加利福尼亚州南部重要的工业城市圣迭戈（San Diego），是有名的细胞学试剂品牌，作为前沿的细胞学分析检测试剂盒生产商，为生物技术和研究类客户提供好的基于细胞功能研究以及疾病等方面的g端产品和技术服务。产品主要涵盖细胞研究、细胞信号通路和蛋白质生物学、代谢研究、病原体和毒素、干细胞研究等领域。全球众多大学、政府研究机构、生物、制药企业的科研实验室均在使用Cell Biolabs的产品。  

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