重组腺病毒在研究和治疗应用中具有巨大的潜力。在将遗传物质引入宿主细胞时，它们提供了许多优势。其允许的宿主细胞范围非常广泛。该病毒已被用于感染许多哺乳动物细胞类型（包括增殖性和非增殖性细胞），以实现重组蛋白的高效表达。重组腺病毒特别适用于那些通过脂质体转染效率较低的细胞系中的基因转移和蛋白表达。病毒进入细胞后，保持染色体外存在（即不整合到宿主染色体中，因此不会激活或失活宿主基因）。最近，重组腺病毒已被用于将RNA干扰（RNAi）传递到细胞中。

HEK 293细胞及其变体被用作病毒扩增的宿主细胞。重组腺病毒可以在高滴度下生长（10??病毒颗粒/mL，可浓缩至10??病毒颗粒/mL），并可通过Cell Biolabs的ViraBind?腺病毒纯化试剂盒或传统的CsCl超速离心法进行纯化。

病毒载体传递基因的一个特殊挑战是准确测量病毒滴度。传统上，通过培养中的噬菌斑形成单位（PFU）测定感染性颗粒，该方法根据稀释度计算病毒噬菌斑的数量。这些方法耗时（10天），需要较长的感染期，并且存在高度的实验间变异性和受病毒-细胞相互作用的影响。Cell Biolabs的QuickTiter?腺病毒滴度免疫测定试剂盒利用针对腺病毒六邻体蛋白的抗体，通过免疫细胞化学染色观察感染细胞。六邻体蛋白是腺病毒衣壳中更大且丰富的结构蛋白，它们对称分布以形成衣壳的面。

Cell Biolabs的QuickTiter?腺病毒滴度免疫测定试剂盒提供了一种快速且完整的系统，用于测定病毒的感染性滴度。该试剂盒提供的试剂足以在24孔板中进行多达100次滴定。与经典的噬菌斑测定法所需的10天感染期相比，该试剂盒仅需2天感染期。试剂盒中的六邻体蛋白抗体通过免疫细胞化学识别所有41种腺病毒血清型，只要病毒能够在HEK 293细胞中扩增，就可以与任何腺病毒系统配合使用。

作为Cell Biolabs全国总代理，艾美捷科技强烈推荐Cell Biolabs销售产品QuickTiter 腺病毒滴度免疫测定成套工具。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

QuickTiter 腺病毒滴度免疫测定成套工具检测原理：

1. 在24孔或12孔板中接种293细胞，孵育1小时  

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2. 准备腺病毒系列稀释液，并感染293细胞48小时  

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3. 进行抗六邻体蛋白免疫细胞化学染色  

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4. 计数阳性细胞并计算病毒滴度  

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试剂盒组成（干冰运输）

1. 抗六邻体蛋白抗体（1000倍稀释）（部件编号10901）：一支30 ?L的管  

2. 二抗，HRP偶联物（1000倍稀释）（部件编号10902）：一支50 ?L的管  

3. DAB底物（25倍稀释）（部件编号10903）：一支1.5 mL的管  

4. 稀释液（10倍稀释）（部件编号10905）：一瓶4.5 mL  

5. Ad-β-gal阳性对照（部件编号10904）：一支50 ?L的管，浓度为1.0×10? IFU/mL  

未提供材料

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2. HEK 293细胞及细胞培养生长培养基  

3. 甲醇  

4. 1% BSA/PBS  

5. H?O?  

6. 光学显微镜  

7. （可选）β-半乳糖苷酶染色试剂盒（货号AKR-100）  

保存方法

收到后，将Ad-β-gal阳性对照保存在-80℃。将试剂盒中的其他组分保存在4℃。

结果示例

以下图表展示了典型的滴定结果。以下数据仅供参考，不应用于解释实际结果。

图：Ad-β-gal滴定。** 使用不同稀释度的Ad-β-gal阳性对照感染HEK 293细胞48小时。按照检测说明进行抗六邻体蛋白免疫染色，并使用β-半乳糖苷酶染色试剂盒（货号AKR-100）进行X-gal染色。

文献参考：

1. Hickey, J.M. et al. (2022). Measurement of Adenovirus-Based Vector Heterogeneity. J Pharm Sci.doi: 10.1016/j.xphs.2022.12.012.

2. Sonugür, F.G. et al. (2022). Incubation Temperature and Period During Denarase Treatment and Microfiltration Affect the Yield of Recombinant Adenoviral Vectors During Downstream Processing. Mol Biotechnol. doi: 10.1007/s12033-022-00616-8.

3. Nie, J. et al. (2022). Optimization of an adenovirus-vectored zoster vaccine production process with chemically defined medium and a perfusion system. Biotechnol Lett. doi: 10.1007/s10529-022-03302-6.

4. Padron-Regalado, E. et al. (2022). STING-pathway modulation to enhance the immunogenicity of adenoviral-vectored vaccines. Sci Rep. 12(1):14464. doi: 10.1038/s41598-022-18750-3.

Cell Biolabs公司位于美国加利福尼亚州南部重要的工业城市圣迭戈（San Diego），是有名的细胞学试剂品牌，作为前沿的细胞学分析检测试剂盒生产商，为生物技术和研究类客户提供好的基于细胞功能研究以及疾病等方面的g端产品和技术服务。产品主要涵盖细胞研究、细胞信号通路和蛋白质生物学、代谢研究、病原体和毒素、干细胞研究等领域。全球众多大学、政府研究机构、生物、制药企业的科研实验室均在使用Cell Biolabs的产品。  

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