该产品可用于细胞和组织缺氧的免疫化学检测，包括免疫荧光、免疫过氧化物酶法或流式细胞术。Hypoxyprobe?-1 RED ATTO 594试剂盒在福尔马林固定、石蜡包埋的大鼠肿瘤组织中提供强有力的免疫染色，并且背景非常低。

规格

a. Hypoxyprobe?-1 RED ATTO 594试剂盒含有100 mg、200 mg或1000 mg的Hypoxyprobe?-1（噻米嗪盐酸盐）。通常在动物实验中使用的剂量为60 mg/kg体重。

b. 每个试剂盒（100 mg和200 mg）含有一瓶，或者每个1000 mg试剂盒含有两瓶，瓶中包含200微升稀释后的RED ATTO 594染料结合的IgG1大鼠单克隆抗噻米嗪抗体（克隆号11.23.22.R）。每瓶含有200微升0.50 mg/ml的RED ATTO 594染料-MAb1溶液，溶液中含有1% BSA和0.09%叠D化钠。RED ATTO 594染料-MAb1的更佳稀释度由研究者自行确定，但发现1:50-100的稀释比例在大鼠肿瘤组织中能产生强的免疫荧光染色。RED ATTO 594染料-MAb1专门设计用于免疫荧光，能够在荧光显微镜下观察，亦可用于流式细胞术和西方印迹应用。通常，在免疫荧光中的抗体稀释度低于免疫过氧化物酶检测系统中使用的稀释度。

不包括的内容

未提供用于免疫组化分析的标准试剂。

作为Hypoxyprobe在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐Hypoxyprobe销售产品【缺氧探针】ATTO 594。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

缺氧探针?-1 RED ATTO 594试剂盒组件详细描述：

缺氧探针?-1是一种取代的2-硝基咪唑，其化学名称为盐酸匹莫醇（pimonidazole hydrochloride），分子量为290.8；水溶性为400毫摩尔（116毫克/毫升）；在324纳米波长下具有紫外线吸收（在0.9%生理盐水中的消光系数为7020）。其游离碱性形式匹莫醇的分子量为254.3，pKa为8.7，辛醇-水分配系数为8.5。有关缺氧探针?-1的作用机制、固体缺氧探针?-1在室温下避光储存已达两年，并在0.9%生理盐水（100克/升）中于4°C储存了4.5年而没有发现降解（通过紫外光和高效液相色谱分析）。匹莫醇在缺氧细胞中被还原活化，并与蛋白质、肽和氨基酸中的巯基（硫氢基）形成稳定的加合物。RED ATTO 594染料-MAb1与这些加合物结合，从而实现其通过免疫化学方法的检测。

RED ATTO 594染料-MAb1是一种与染料结合的鼠IgG1单克隆抗体（单克隆克隆4.3.11.3），其浓度为0.5毫克/毫升，溶解在含1% BSA和0.09%叠D化钠作为稳定剂的PBS中。感兴趣的组织可以通过免疫组化技术在冷冻固定切片或福尔马林固定石蜡包埋切片上进行研究，或通过组织解离后的流式细胞术进行分析。注意：RED ATTO 594染料-MAb1与匹莫醇的蛋白质、肽和氨基酸加合物结合，但在免疫组化过程中，组织处理会洗去肽和氨基酸加合物，因此免疫组化检测缺氧主要依赖于缺氧组织中匹莫醇的蛋白质加合物。

存储

a. 在黑暗中室温保存Hypoxyprobe?-1固体（也可在2-8°C的黑暗中保存）。

b. 在黑暗中将RED ATTO 594染料-MAb存放在2-8°C的温度下。请勿冷冻。

检测说明：

正常或肿瘤组织缺氧的研究开始于静脉输注、腹腔注射或口服摄入Hypoxyprobe?-1（哌莫地喹盐酸盐）溶液，剂量为60 mg/kg体重。对于一只25克的老鼠，这相当于1.5 mg/只。虽然在小鼠中使用高达400 mg/kg的剂量未观察到明显的毒性或组织缺氧变化，但60 mg/kg的剂量能以低成本提供良好的免疫染色效果。

Hypoxyprobe?-1在生理盐水中的溶解度为116 mg/ml，因此可以使用非常小的体积来给药。注射或摄入后，Hypoxyprobe?-1会分布到所有组织，包括大脑，但只有在氧气浓度低于14微摩尔的细胞中，它才会与含硫蛋白质形成加合物——相当于37°C时的部分压力pO2 = 10 mm Hg。除了肿瘤外，正常组织如肝脏、肾脏和皮肤中也存在pO2 = 10 mm Hg或更低的细胞，这些正常组织会结合Hypoxyprobe?-1。Hypoxyprobe?-1在小鼠中的血浆半衰期约为25分钟。相比之下，老鼠的血浆半衰期为45分钟，狗为90分钟，人类为300分钟。

在Hypoxyprobe?-1给药后15到90分钟内，可以收集感兴趣的老鼠组织。在收集时，组织中的Hypoxyprobe?-1会在组织缺氧时结合，但与组织在15到90分钟实验中接触的Hypoxyprobe?-1量相比，残留的Hypoxyprobe?-1非常少，因此由于残留的Hypoxyprobe?-1而造成的非特异性结合是不可检测的。

除了动物研究外，Hypoxyprobe?试剂盒还可以用于细胞培养。通常，细胞悬液在100至200微摩尔的Hypoxyprobe?-1存在下，缺氧培养1到2小时。细胞通过细胞离心法收集，固定后用RED ATTO 594 MAb-1进行免疫染色。

建议的免疫染色方案：

使用FITC标记的抗哌莫地喹大鼠单克隆抗体，对福尔马林固定的石蜡包埋组织切片中的哌莫地喹加合物进行免疫染色。

Hypoxyprobe, Inc.（缺氧探针公司）专注于研发非侵略性的缺氧标志物（Hypoxia maker）和缺氧依赖性的细胞因子，所有产品皆基于Pimonidazole核心结构来开发。 使用Pimonidazole HCl作为缺氧标记物，广泛用在狗、大小鼠。缺氧探针试剂盒核心组分为：缺氧探针（Pimonidazole 或CCI-103F）和缺氧探针的抗体。不同试剂盒中的探针和抗体标记不同（可应用于免疫荧光（IF），免疫组化（IHC），WB或流式细胞分析（FC））

艾美捷科技是Hypoxyprobe的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

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