一、染色体显带技术
（一）Q 显带法（荧光显带）
标本预处理取干热预处理或自然老化的染色体标本，浸入 pH6.0 缓冲液中漂洗 5~10 分钟
荧光染色转移至 pH6.0 的 GM 或 QD 荧光染液中，染色 5~10 分钟
漂洗去浮色用新鲜 pH6.0 缓冲液漂洗 2 次，每次 5 分钟
镜检观察标本面滴加 1~2 滴缓冲液，加盖玻片（避免气泡），荧光显微镜下观察
（二）G 显带法
1. 胰酶 - Giemsa 混合显带法
预处理中期染色体标本 60℃温箱处理 20~30 分钟（或 37℃过夜），浸入 56℃、0.025M pH6.8 磷酸缓冲液温浴 10 分钟
消化染色液配制（现用现配）
- 0.025M pH6.8磷酸缓冲液 73.0ml
- 甲醇 27.0ml
- Giemsa干粉 50.0mg
- 0.25%胰酶溶液 0.3~0.4ml
消化染色标本浸入混合液中反应 10~30 分钟
封片自来水冲洗→蒸馏水漂洗→晾干→二甲苯透明 2~3 分钟→中性树脂封固
2. 常规 Giemsa 显带法
预处理标本 60~80℃温箱处理 20~30 分钟（或 37℃过夜）
胰酶消化0.85% NaCl 配制的 0.25% 胰蛋白酶溶液消化 3~5 分钟
染色吸水纸吸去多余胰酶液，立即浸入 Giemsa 染液染色 10 分钟
封片自来水洗→蒸馏水漂洗→晾干→二甲苯透明 2~3 分钟→中性树胶封固
二、姐妹染色单体分化染色技术
（一）BUdR 掺入预处理
培养液制备含 3~10μg/ml BUdR 的完全培养液（避光保存）
细胞培养
传代细胞：末次传代后换用 BUdR 培养液
人末梢血：直接使用 BUdR 培养液，培养瓶用黑布包裹，37℃培养
周期控制培养至细胞经历 2 个细胞周期（人外周血 48~72 小时），加秋水仙素后制片
（二）分化染色方法
1. 热磷酸处理法（方法一）
标本老化 1~2 天
85~89℃预热的 1M NaH2PO4 溶液处理 15 分钟
温蒸馏水漂洗→蒸馏水冲洗→晾干→Giemsa 染色 10 分钟→封固
2. FPG 法（荧光 - 光解 - Giemsa）
标本准备：含 BUdR 的中期染色体玻片
荧光染色：0.5μg/ml Hoechst 33258（pH7.0 缓冲液配制）染色 12~15 分钟
光解处理：20W 黑光灯（距离 5cm）照射 30 分钟
热修复：50~60℃ 2×SSC 液温育 2 小时，蒸馏水冲洗晾干
复染封固：pH6.8 的 2% Giemsa 染色 15 分钟，透明封固
3. 日光照射法（方法三）
标本处理：30W 日光灯下（灯距 3cm）照射 6 小时
热缓冲处理：60℃ 2×SSC 液处理 15 分钟
Giemsa 染色 10 分钟，常规封固
三、染色体脆性位点检测优化方案
提高检出率关键措施：
培养液血清浓度降至 5%
使用无叶酸 MEM-Fra 培养基
调节 pH 至 7.5
四、微核检测技术
（一）细胞培养法（方法一）
样本处理静脉血 0.5ml 肝素抗凝，加入 5ml 含 20% 小牛血清的 Eagle 培养液（含 40μg/ml PHA）
培养固定37℃培养 48~72 小时→1000rpm 离心 8 分钟→3:1 甲醇 / 冰醋酸固定 3 次（每次 15 分钟）
制片染色冷冻载片滴片法→自然干燥→10% Giemsa（pH6.8）染色 15 分钟
（二）甲基纤维素富集法（方法二）
样本处理肝素抗凝血 0.5~0.6ml，加入等体积 0.5% 甲基纤维素，37℃静置 30 分钟
离心制片2000rpm 离心 10 分钟→弃上清→沉淀物涂片→Wright 法染色
（三）明胶沉降法（方法三）
血液处理无名指血 0.6ml，去除纤维蛋白，加入 3% 明胶混匀，37℃自然沉降 50 分钟
染色观察吸上清→离心沉淀→涂片干燥→Wright 染色 30 分钟 + Giemsa 复染 2 分钟
五、非程序 DNA 合成检测（UDS）
（一）放射自显影法
细胞培养WI-38 成纤维细胞培养至汇合，换用无精氨酸 EMEM 培养液培养 20~24 小时
处理标记加入 10mM 羟基脲（阳性对照加 MNNG）培养 2 小时→3H-TdR 处理 20~24 小时
标本制备BSS 漂洗→固定→涂放射自显影胶→曝光显影→Giemsa 染色
结果分析油镜下计数核银粒数，排除 S 期细胞，计算银粒数 / 核均值或 10 银粒细胞百分率
（二）液闪计数法
前处理同放射法（至 BSS 漂洗步骤）
细胞消化0.25% 胰蛋白酶制成单细胞悬液
计数制备10% 三氯醋酸处理→玻璃纤维滤膜收集细胞→无水乙醇脱水→闪烁液计数
结果表示dpm/10⁶细胞或 cpm / 每皿细胞
技术规范说明：
所有染色步骤需控制温度、时间参数，避免交叉污染
荧光染料需避光操作，显带标本建议当天观察
微核检测标本应新鲜制备，染色 pH 值严格校准
UDS 实验需设置阳性 / 阴性对照，确保放射性操作安全
本规程适用于染色体核型分析、突变检测及 DNA 损伤研究，可根据实验目的选择具体方法组合使用,相关产品的购买可以咨询艾美捷科技。
