PDE5A1实验试剂盒是一种基于荧光偏振（FP）的均相96孔实验试剂盒，专为筛选和分析PDE5A1（磷酸二酯酶5A1）抑制剂而设计。该实验利用了一种特异性的荧光磷酸结合纳米颗粒。试剂盒包含足够量的纯化重组PDE5A1、荧光探针、PDE实验缓冲液、结合剂和稀释液，可进行100次反应。

艾美捷PDE5A1检测试剂盒：

货号：BPQ-60350

别名：cGMP特异性3',5'-环状磷酸二酯酶，cGMP结合的cGMP特异性磷酸二酯酶，CGB-PDE，PDE5A，PDE5，PDE5-A1，PDE  

储存/稳定性： 按照说明储存时，该实验试剂盒在收到之日起6个月内可达到更佳性能。  

实验试剂盒形式：荧光偏振  

物种：人  

运输温度：-80°C  

科学分类：磷酸二酯酶（PDE）  

监管状态：仅限研究使用。

应用：用于研究酶动力学和筛选小分子抑制剂，适用于高通量筛选（HTS）应用中的药物发现。

提供材料：  

目录编号 | 名称 | 数量 | 储存条件  

60050 | PDE5A1* | >1 µg | -80°C  

60201 | FAM-Cyclic-3′,5′-GMP | 2 x 1.2 nmol | -80°C  

60393 | PDE实验缓冲液（未完全配方） | 25 ml | -20°C  

60390 | PDE结合剂 | 100 µl | 4°C  

60392 | 结合剂稀释液（cGMP） | 10 ml | 4°C  

0.5 M DTT | 200 µl | -20°C  

79685 | 低吸附性黑色96孔板 | 1个 | 室温  

蛋白质的浓度因批次而异，具体浓度将标注在含有蛋白质的管上。  

FAM-Cyclic-3′,5′-GMP以粉末形式提供。每支安瓿在使用前需用400 µl完全配方的PDE实验缓冲液溶解。

所需材料（但未提供）：  

可调节微量移液器及无菌吸头  

旋转或摇床平台  

能够测量荧光偏振的荧光微孔板读数仪（激发波长λex=470 nm（5 nm带宽），发射波长λem=528 nm（10 nm带宽））

注意事项：  

实验中DMSO的最终浓度不应超过1%。  

具有λex=470 nm激发和λem=528 nm发射的荧光化合物可能会干扰实验结果。  

建议单独测试化合物，以确定其是否会对实验结果产生潜在干扰。

结果计算：  

荧光偏振是衡量荧光探针在激发和发射之间发生分子旋转量的指标。它可以通过测量探针相对于偏振激发光方向发出的垂直（I⊥）和平行（I‖）荧光强度值来确定。  

图：荧光偏振原理  

A. 当荧光标记的探针与较大的蛋白结合时，会形成一个大分子量的复合物，该复合物的旋转能力较弱。在这种状态下，探针的旋转扩散减少，因此当它被偏振光激发时，仍会发出高度偏振的光，其偏振度与分子旋转速率成反比。  

B. 在存在与蛋白有亲和力的化合物时，荧光探针保持在溶液中并能够快速旋转。未结合的探针具有较高的旋转扩散，因此当它被偏振光激发时，会发出的光可以在垂直和平行滤光片中被检测到。

文献参考：

Ahmed W., et al., 2021 Biomedicine & Pharmacotherapy 134:111128.

Huang W., et al., 2020 Nat Commun 11:3191.