Human T-Activator CD3/CD28 Beads旨在用于人类T细胞的分离和体外扩增。它可应用于CAR-T和其他T细胞培养技术的应用。Human T-Activator CD3/CD28 Beads由直径为4.5 μm的磁性珠子与抗人CD3和抗人CD28抗体结合而成，为人类T细胞的分离和扩增提供了简单的方法。
首先，人T 细胞激活磁珠，CD3/CD28单抗偶联磁珠能够轻松将CD3+ T细胞从外周血单个核细胞(PBMCs)中分离和浓缩。在分离后，磁性珠子上的抗CD3和抗CD28抗体的共价结合提供了调节T细胞活化和扩增所需的初级和共刺激信号。
在细胞扩增过程中，细胞培养需要额外添加其他细胞因子，如人源IL-2、IL-7和IL-15，以实现更高效的活化。在10-13天的培养期内，激活的细胞可以扩增1000倍。
货号：C-BETA2001
规格：1mL/10mL
储存：2°C至8°C，请勿冷冻
操作步骤：洗涤Human T-Activator CD3/CD28 Beads
1. 将Human T-Activator CD3/CD28 Beads（珠子）重新悬浮于管中（振荡30秒以上，或者倾斜旋转5分钟）。
2. 将珠子转移到容器中，加入所需体积。
3. 加入相同体积的PBS（含1% HSA）。如果珠子体积小于1mL，加入1mL含1% HSA的PBS进行悬浮。
4. 将管子放在磁架上1分钟，然后弃掉上清液。
5. 将管子从磁架上取下，使用相同体积的含1% HSA的PBS重新悬浮珠子。
分离CD3+ T细胞
1. 对于Ficoll分离的PBMCs，轻轻将细胞悬浮于含1% HSA的PBS中，并将细胞密度调整为2-5 × 107 cells/mL。注意细胞总数不应超过2 × 108 cells/mL。注意：在开始之前，通过流式细胞术确定样品中CD3+ T细胞的百分比。
2. 将洗涤后的珠子以3（珠子）：1（CD3+ T细胞）的比例加入PBMCs中，如果细胞是纯分离的T细胞，则将珠子与细胞的比例调整为1：1。
3. 以50~120 rpm/min的速度旋转样品，并在室温下孵育30分钟。
4. 用T细胞培养基或含1% HSA的PBS稀释珠子和细胞混合物，以确保磁选分离的体积。然后将管子放在磁架上1~2分钟。
5. 去除上清液，然后用含300IU/mL IL-2的T细胞培养基重新悬浮珠子和细胞混合物，并将细胞密度调整为0.5 × 106 cells/mL~1 × 106 cells/mL。
6. 将细胞悬液放入37°C、5% CO2的培养箱中孵育。
T细胞的活化和扩增:
1. 从培养的第3天开始，每天计算T细胞的数量。
2. 在细胞扩增的后期，定期轻轻吹动培养中的细胞悬液，以分离珠子和细胞。
3. 当CD3+ T细胞数量超过1 × 106 cells/mL时，加入含IL-2的T细胞培养基稀释细胞，并将细胞密度调整到约0.5 × 105 cells/mL左右。
4. 在培养结束时（第9-14天），计数细胞并用磁架去除珠子。
人T 细胞激活磁珠，CD3/CD28单抗偶联磁珠数据参考：
图1：磁选分离CD3+ T细胞。PBMCs与Human T-Activator CD3/CD28 Beads（目录号C-BETA2001）以3个珠子与每个细胞的比例孵育30分钟，通过流式细胞术分析阳性（分离）细胞的分离效率。
