Assay Genie脂肪酸氧化检测试剂盒是一种高灵敏度的比色法检测试剂盒，用于定量检测细胞和组织中的脂肪酸氧化。这种特别的检测方法使用了高溶解性的辛酰辅酶A（Octanoyl-CoA）底物，能够比长链且溶解性较差的底物（例如18碳不饱和脂肪酸油酸）更准确地测量脂肪酸氧化。

作为Assay Genie全国总代理，艾美捷科技强烈推荐Assay Genie销售产品脂肪酸氧化（FAO）检测试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

脂肪酸氧化（FAO）检测试剂盒：

产品名称：脂肪酸氧化检测  

货号：BR00001  

应用范围：定量检测细胞和组织中的脂肪酸氧化。  

注意事项：仅供研究使用。

细胞/组织提取物的制备

步骤| 操作  

步骤1| 用冰冷的磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤约10?个细胞两次，并w全去除细胞沉淀中的PBS。细胞沉淀应保存在-80℃。组织样本应c底用PBS洗涤以去除可能引起结果不一致的血细胞。  

步骤2| 用冰冷的去离子水（dH?O）稀释10倍细胞裂解液，制备足够的1倍细胞裂解液。向细胞沉淀中加入50-100微升冰冷的1倍细胞裂解液，通过上下移液（轻柔但c底）提取细胞。将裂解液置于冰上，间歇性轻柔振荡5分钟。如果裂解液黏稠，可加入更多1倍细胞裂解液并重复移液。在低温离心机中以更大速度离心裂解液5分钟，收集上清液用于检测。组织样本在1倍细胞裂解液中匀浆，并通过离心澄清裂解液。每0.5毫升1倍细胞裂解液用于匀浆约25毫克组织。  

步骤3| 进行蛋白定量检测以确定样本蛋白浓度。通过用冰冷的1倍细胞裂解液稀释，将样本蛋白浓度调整至1-3毫克/毫升。始终将蛋白样本保存在冰上。冻融后的粗蛋白裂解液可能会降低酶活性。裂解液应保存在-80℃。

注意：不要使用含有还原剂或SDS的缓冲液。

试剂解冻

将解冻后的脂肪酸氧化（FAO）检测液和20倍FAO底物置于冰上。在移液前轻轻振荡溶液。尽量减少试剂解冻的时间，使用后立即冷冻保存。

对照液和反应液的制备

-对照液：将1份去离子水（dH?O）与20份FAO检测液混合，例如25微升去离子水与500微升FAO检测液混合。检测过程中将新制备的对照液置于冰上保存。  

-反应液：将1份20倍FAO底物与20份FAO检测液混合，例如25微升20倍FAO底物与500微升FAO检测液混合。将溶液置于冰上并立即使用。每个蛋白样本分别用50微升对照液和50微升反应液处理。

试剂盒描述  

脂肪酸提供的ATP比碳水化合物（如葡萄糖）更多。在能量需求高的组织（如心脏组织）中，高达50-70%的能量来自脂肪酸β-氧化，该过程将脂肪酸转化为乙酰辅酶A，同时在线粒体中产生FADH?和NADH。

这种严格的需氧氧化途径包括四个不同的步骤：  

1. 由酰基辅酶A脱氢酶催化的酰基辅酶A脱氢反应；  

2. 由烯酰辅酶A水合酶催化的水合反应；  

3. 由3-羟基酰基辅酶A脱氢酶催化的脱氢反应；  

4. 由β-酮硫解酶催化的硫解反应。

脂肪酸β-氧化系统在人类中的重要性体现在存在一组遗传性疾病，称为脂肪酸氧化障碍（FAODs）。这是一组脂肪酸转运和氧化缺陷的异质性疾病，以常染色体隐性方式遗传，具有广泛的临床表现。

证据表明，胎儿发育过程中脂肪酸氧化（FAO）活性的调节不仅对胎儿生命至关重要，还对成年期的健康和疾病有影响。脂肪酸氧化活性的测量为许多疾病的病理生理学和代谢基础提供了宝贵的见解。

Assay Genie的非放射性脂肪酸氧化检测基于辛酰辅酶A底物的氧化。NADH的生成与四氮杂唑盐INT的还原偶联，形成红色的甲臜。红色甲臜的强度与脂肪酸氧化活性的增加成正比。

检测液和底物应分装后保存在-80℃。

Assay Genie旗下涵盖了15种种属的高品质的ELISA试剂盒及多种抗体，可检测的指标种类丰富，覆盖免疫、代谢和分子等多种研究领域，是科学研究中便捷的小助手。  

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