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黄山快速消化丨内切酶EcoRI, 无动物源性

分类:新闻中心 发布时间:1970-01-01 17次浏览

EcoRI(“I”是“1”的意思...

EcoRI(“I”是“1”的意思)是一种限制性核酸内切酶,来自某些特定品系的大肠杆菌(E. coli,也是其名称由来),是此种细菌体内参与限制修饰系统的酶。在分子生物学或其他分子层次的生物学研究上,EcoRI限制酶能专一识别GAATTC序列,并在G和A之间将这段序列切开切割后的小片段端点为5'端突出的黏状末端(sticky end)。

 

经过基因工程改造的EcoRI,ADCF,能够在5~15分钟内消化DNA。它可用于鉴定质粒DNA、PCR产物和基因组。EcoRI,ADCF具有以下特点:在5到15分钟内快速消化,极好的酶活性冗余,易于处理底物过量或具有挑战性的模板消化。这种酶不含动物来源的成分

 

艾美捷内切酶EcoRI, 无动物源性

Cat #: C-BSM2504S

Size: 5000 U

Storage: -20°C

 

内切酶EcoRI, 无动物源性使用方法:

1.快速DNA消化方案

① 按照指示的顺序在冰上混合以下反应组分:

51.png

a.DNA底物不应含有苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐,否则会影响EcoRI、ADCF的酶活性;甲基化DNA会抑制某些限制性内切酶的消化

② 轻轻混合(不要涡流)并向下旋转;

③ 在37°C下培养15分钟-60分钟,一般建议5~10 U酶/ug DNA,10~20 U酶/ugDNA,温浴1小时,如果需要过夜酶消化,请将酶量调整为10;④通过在80°C下加热20分钟使酶失活,或通过基于柱的苯酚/氯仿纯化终止反应。

⑤ 添加到反应中的酶的体积不应超过总体积的10%,以避免过量的甘油,这可能导致星形活性。

⑥ 限制性内切酶储存缓冲液中的添加剂(如甘油和盐)和底物中的污染物(如盐、EDTA或乙醇等)是相似的。反应体积越小,对酶消化反应的抑制作用越强。

⑦ 对于小规模反应,推荐的反应组分如下。

DNA     0.1 μg    0.5 μg

EcoRI, ADCF    1 U       5 U

10× EcoRI Buffer 1 μl 2.5 μl

Total      10 μlb     25 μl

b.为了避免蒸发,10μl反应缓冲液的孵育时间不应超过1小时

 

https://www.amyjet.com/products/C-BSM2504S-5000U.shtml

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