除了不同的细胞培养模型和人体材料研究外，小鼠和大鼠是基础研究和临床前研究的理想模型系统。因此，这种酶联免疫吸附试验（ELISA）被开发出来，作为在小鼠和大鼠中测量胰岛素样生长因子I（IGF-I）的工具，用于研究和临床前研究。然而，小鼠和人类中IGF-1的可比性是有限的，但以下是关于人类IGF-I系统的一些背景信息：胰岛素样生长因子（IGF）I和II在调节许多细胞类型的增殖和分化中起着关键作用（1-3）。IGF-I与生长调节素C（Sm-C）相同（4），分子量为7649道尔顿（5）。其主要调节因素是生长激素（GH）和营养（6）。与许多其他肽类激素不同，IGFs与特定的结合蛋白（IGFBP）紧密结合。目前已知的七种IGFBP（7,8,22）要么与IGF-I和IGF-II结合的亲和力相似，要么偏好IGF-II（9,10）。IGF-I测量的一个主要问题是由于IGFBPs在测定中的干扰。在未经处理的血清样本中直接测定（11）会给出错误的值，因为在测定孵化过程中IGF-I/IGFBP-3复合物的解离极其缓慢（见图1）。IGF-1（小鼠/大鼠）ELISA用于测量小鼠和大鼠血清和血浆（肝素、EDTA或柠檬酸盐）中的胰岛素样生长因子-1（IGF-I）。仅供研究使用。不用于诊断程序。

图1:IGFBP对IGF-I测量的干扰。在0.5 ng（左）或5 ng（右）hIGFBP-3存在的情况下，通过常规和IGFBP阻断试验测定已知浓度的IGF-I。

为了避免这些困难，开发了这种分析方法，其中没有特殊的样品制备测量前需要，但样品在特殊条件下的酸化和稀释除外设计缓冲系统。

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Igf-1(小鼠，大鼠)elisa, 96孔检测原理：

超灵敏的人类生长激素ELISA是一种夹心测定法。它利用了一种涂在微量滴定板孔上的特异性、高亲和力的多克隆兔抗血清。样品中的hGH与固定化抗血清定量相关。在接下来的步骤中，生物s化抗体与hGH结合。洗涤后，加入链霉抗生物s蛋白-过氧化物酶偶联物，其与抗体的生物s高度特异性结合，并根据样品的hGH水平催化底物定量变色。

图2:IGFBP阻断IGF-I ELISA的原理

技术说明

储存条件

收到试剂盒后，在其有效期内，将其存放在2-8°C。冻干试剂在重组后应存放在-20°C。避免反复冻融。

储存寿命

未使用的试纸条和微孔板应与干燥剂一起密封存放在2-8°C的夹锁袋中，并在提供的框架内使用。重组后的组分，标准品A-E和对照血清KS1和KS2必须存放在-20°C（最多2个月）。

注意：标准品应仅解冻一次。如有必要，应分装在适当的体积中。再次使用时，应快速但轻柔地解冻（避免温度升高超过室温，避免过度涡旋）。

1:20稀释的洗涤缓冲液WP在2-8°C下稳定4周。

试剂准备

使用前将所有试剂置于室温（20 - 25°C）。缓冲液中的可能沉淀在使用前必须通过混合和/或加热溶解。不能混合不同批号的试剂。

重组

标准品A-E和对照KS1和KS2用样品缓冲液PP重组。建议将重组试剂在室温下放置15分钟，然后用涡旋混合器c底但轻柔地（不应产生泡沫）混合。

稀释

重组后，对照KS1和KS2用样品缓冲液PP按与样品相同的比例稀释。

所需体积的洗涤缓冲液WP是通过将提供的20倍浓缩液与蒸馏水按1:20稀释来准备的。

测定程序

进行测定时，空白、标准品A-E、对照KS1和KS2及样本应尽可能快地（例如<15分钟）移液。为避免由于孵育时间差异导致的测定结果变化，抗体结合物AK和酶结合物EK以及随后的底物溶液S应与样本以相同的顺序和相同的时间间隔添加到板中。停止溶液SL应与底物溶液S以相同的顺序添加到板中。所有测定（空白、标准品A-E、对照KS1和KS2及样本）应进行双重测定。为获得更佳结果，建议准确移液并遵守操作规程。

文献参考：

1. Baxter RC. 1986 The somatomedins: insulin-like growth factors. Adv Clin Chem.25:49-115

2. Daughaday WH, Rotwein P. 1989 Insulin-like growth factors I and II. Peptide, messengerribonucleic acid and gene structures, serum, and tissue concentrations. Rev. 10:68-91

3. Spencer EM (Ed.) 1991 Modern Concepts of Insulin-Like Growth Factors. New York:Elsevier

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

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