血红蛋白（HM）是红细胞中的含铁氧转运蛋白。它吸收氧气并将其输送到组织以维持细胞的存活率。血红蛋白的每个亚基都是球状蛋白具有嵌入的血红素基团。每个血红素基团都含有一个铁原子，负责结合氧气。血红蛋白减少会导致贫血症状。

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO销售产品血红蛋白(马)ELISA试剂盒，96孔。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

血红蛋白(马)ELISA试剂盒，96孔检测原理：

双抗体夹心酶联免疫吸附测定（ELISA）的原理在图1中表示。在这种测定中，样品中的血红蛋白与已吸附到聚苯乙烯微孔板表面的抗血红蛋白抗体反应。通过洗涤去除未结合的蛋白质后，加入与辣根过氧化物酶（HRP）结合的抗HM抗体。这些酶标记的抗体与之前结合的HM形成复合物。经过另一次洗涤步骤后，通过添加显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB），测定免疫吸附剂上结合的酶。结合的酶量与测试样品中HM的浓度直接相关；450纳米处的吸光度是测试样品中HM浓度的量度。测试样品中HM的量可以从标准曲线中插值得出，并根据样品稀释进行校正。

试剂（足够96次测定的数量）

稀释液浓缩液（测定缓冲液） 一瓶含有50毫升5倍浓缩的稀释测定缓冲液。

洗涤液浓缩液 一瓶含有50毫升20倍浓缩的洗涤液。

酶-抗体结合物100倍 一瓶含有150微升与辣根过氧化物酶结合的亲和纯化抗马血红蛋白抗体，在稳定缓冲液中。

显色底物溶液 一瓶含有12毫升3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）和过氧化氢，在柠檬酸缓冲液中，pH值为3.3。

终止液 一瓶含有12毫升0.3摩尔硫酸。警告：避免与皮肤接触。

抗马血红蛋白ELISA微孔板 十二个可移动的八（8）孔微孔条在孔架框架中。每个孔都涂有亲和纯化的抗马血红蛋白。

马血红蛋白校准液 一瓶含有马血红蛋白校准液。

试剂准备

稀释液浓缩液

提供的稀释液是5倍浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水（1份缓冲液浓缩液，4份dH2O）稀释1/5。

洗涤液浓缩液

提供的洗涤液是20倍浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水（1份缓冲液浓缩液，19份dH2O）稀释1/20。在储存温度较低时，浓缩液中结晶形成并不少见。在稀释前将浓缩液加热至30-35°C可以溶解晶体。

酶抗体结合物

通过向每个微孔板测试条中添加10微升酶-抗体结合物到990微升1倍稀释液中，计算每个微孔板测试条所需的工作结合物溶液量。均匀但轻柔地混合。避免起泡。

显色底物溶液

按提供状态使用。

终止液

按提供状态使用。

抗马血红蛋白ELISA微孔板

按提供状态使用。打开微孔板袋，从袋中取出板。取出在测定中不会使用的所有的条和孔，放回袋中并重新密封。

马血红蛋白校准液

校准液现在的浓度为272.4微克/毫升马血红蛋白标准品需要在使用前立即准备（见下表）。每步之间充分混合。避免起泡。

未提供的所需材料

精密移液器（2至200微升），用于制备和分发稀释液

试管

微孔板洗涤器/抽吸器

蒸馏水或去离子水

微孔板读取器

用于制备试剂和缓冲溶液的各种玻璃器皿

计时器

离心机（用于样本准备）

抗凝剂（用于样本准备）

测定协议

样本稀释

测定样本中血红蛋白的定量需要在测试前对每个测试样本进行稀释。对于大多数血清/血浆样本，单步测定1/5,000的稀释是合适的。对于定量，如果样本产生的结果超出标准曲线的范围，可能需要进行更小或更大的稀释。

为了准备1/5,000的样本稀释，将5微升的样本转移到495微升的1倍稀释液中。这会产生1/100的稀释。接下来，将10微升的1/100稀释样本加入到490微升的1倍稀释液中。这会产生1/5,000的样本稀释。在每个阶段c底混合。

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

作为ALPCO在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的ALPCO产品。

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