
细胞凋亡是细胞的基本特征之一,它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。
AnnexinⅤ是一种分子量为35-36kD的Ca依赖性磷脂结合蛋白,能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的PS高亲和力特异性结合。Annexin V作为一种磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,它通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V是检测细胞早期凋亡的灵敏指标。
艾美捷/Annexin V 是一种磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,它通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合,是检测细胞早期凋亡的灵敏指标。
艾美捷/Annexin V组成成分:
艾美捷/Annexin V建议的染色方案:
1.在冷PBS中清洗细胞两次
2.在冷1X ApoScreen®中重新使用电池膜联蛋白结合缓冲液(SB目录号10045-01)浓度为1 x 106细胞/mL
3.加100mL细胞悬液至5mL聚苯乙烯圆底管
4.加10m共轭ApoScreen®Annexin V
5.轻轻旋转每根试管,在2-8°C温度下培养15分钟,并避光
6.在不清洗的情况下,添加~380m冷1X ApoScreen®Annexin 结合缓冲液到每根管
7.加10mApoScreen®的L7-氨基放线菌素D(7-AAD;SB分类号10042-01)或ApoScreen®碘化丙啶(PI;SB类别号。
艾美捷/Annexin V储存方式:
1.纯化的(UNLB)ApoScreen®Annexin V 以0.1mg纯化的重组蛋白形式从PBS中冻干。储存材料在重构前的-20°C温度下。用1.0毫升的dH2O重新配制。将再造材料储存在2-8°C的温度下。
2.荧光素(FITC)、生物素(BIOT)和菁5(CY5)ApoScreen®附录V结合物在1.0毫升的溶液中作为100次试验提供ApoScreen®Annexin V 结合缓冲液。在2-8°C下储存。
3.R-藻红蛋白(PE)和别藻蓝蛋白(APC)ApoScreen®在1.0毫升PBS/NaN3中,以100次试验的形式提供膜Annexin V结合物和稳定剂。在2-8°C下储存。不要冷冻!
4.保护荧光色素结合物不受光照。如果按照指示储存,试剂在标签上显示的时间内是稳定的。