一、补体 C3 的生物学意义与检测价值

• 自身免疫性疾病：系统性红斑狼疮（SLE）患者血清 C3 水平显著降低，与疾病活动度呈负相关；

• 感染性疾病：脓毒症患者 C3 消耗增加，其水平可作为预后评估指标；

• 肾脏疾病：膜增生性肾小球肾炎（MPGN）患者常出现 C3 沉积，导致肾功能损伤；

• 心血管疾病：C3 基因多态性与年龄相关性黄斑变性（AMD）及非典型溶血性尿毒症综合征（aHUS）风险增加相关。

二、Hycult 人 C3 ELISA 试剂盒的技术参数与性能优势

（一）核心技术参数

（二）性能验证数据

1. 线性关系：通过系列稀释含 50 ng/mL C3 的标准品，获得斜率 0.982、相关系数 R²=0.998 的标准曲线，显示优异的线性关系。

2. 回收率测试：在人血浆中添加 250 ng/mL C3 标准品，回收率范围 92%-108%（均值 101%），证明检测准确性。

3. 精密度：板内变异系数（CV）<8%，板间 CV<10%，确保结果重复性。

（三）技术优势解析

1. 双抗体夹心技术：试剂盒采用预包被的抗 C3 捕获抗体和生物素化检测抗体，特异性识别 C3 的完整构象，避免与 C3b、C3c 等裂解片段交叉反应。

2. 高灵敏度设计：检测下限达 1.6 ng/mL，可有效区分健康人群（血清 C3 水平约 0.8-1.2 g/L）与疾病状态下的微小变化。

3. 灵活检测方案：12×8 孔可拆卸板条设计，支持单次检测 8-96 个样本，适配不同实验规模需求。

4. 操作便捷性：全程 3.5 小时完成，减少实验耗时；即用型试剂和标准化流程，降低人为误差。

三、检测原理与实验流程

（一）检测原理

1. 捕获阶段：预包被于微孔板的抗 C3 抗体特异性结合样本中的 C3 分子；

2. 信号放大：生物素化检测抗体与捕获的 C3 结合，随后加入链霉亲和素 - 辣根过氧化物酶（HRP）复合物，形成 “抗体 - C3 - 生物素抗体 - HRP” 复合物；

3. 显色反应：加入 TMB 底物后，HRP 催化底物显色，颜色深浅与样本中 C3 浓度成正比；

4. 定量分析：通过酶标仪检测 450 nm 吸光度，根据标准曲线计算样本中 C3 含量。

（二）实验流程概述

1. 样本预处理：

• 血清：使用血清分离管（SST）采血，室温静置 2 小时或 4℃过夜，离心后取上清；

• 血浆：采用 EDTA 或枸橼酸钠抗凝，采血后 30 分钟内离心，避免使用肝素抗凝；

• 样本可在 - 20℃或 - 80℃保存，避免反复冻融。

2. 加样与孵育：

• 标准品和样本按 1:100 稀释后加入孔板，37℃孵育 1 小时；

• 依次加入生物素化抗体和 HRP 复合物，每次孵育后需彻底洗涤以去除未结合成分。

3. 显色与检测：

• TMB 底物避光显色 15-20 分钟，草酸终止反应；

• 酶标仪读取 450 nm 吸光度，扣除 540 nm 背景值后计算结果。

（三）关键注意事项

1. 样本处理：溶血样本可能释放内源性过氧化物酶，干扰检测结果；脂血样本需超速离心去除脂质颗粒。

2. 温育条件：严格控制 37℃孵育时间，避免温度波动影响抗体 - 抗原结合效率。

3. 洗涤步骤：使用试剂盒配套洗涤液，每孔洗涤 3 次，每次浸泡 2 分钟，确保彻底去除未结合成分。

4. 安全防护：TMB 底物具有潜在致癌性，需戴手套操作；终止液草酸需避免接触皮肤与黏膜。

四、应用领域与研究价值

（一）临床诊断与监测

1. 自身免疫性疾病：

• SLE 患者血清 C3 水平下降与疾病活动度相关，动态监测可评估治疗反应（如糖皮质激素或免疫抑制剂疗效）；

• 类风湿关节炎（RA）患者 C3 水平升高可能提示炎症活动，结合抗 CCP 抗体可提高诊断特异性。

2. 感染性疾病：

• 脓毒症患者 C3 消耗增加，其水平与疾病严重程度及预后相关，可作为脓毒症休克的预测指标；

• 脑膜炎患者脑脊液 C3 水平升高，辅助鉴别细菌性与病毒性脑膜炎。

3. 肾脏疾病：

• MPGN 和 C3 肾小球病（C3G）患者血清 C3 水平显著降低，结合补体基因检测可明确病因；

• 肾移植排斥反应中，C3 沉积与移植肾损伤程度相关，动态监测有助于调整免疫抑制方案。

4. 心血管疾病：

• AMD 患者玻璃体液 C3 水平升高，靶向 C3 的治疗策略（如抗 C3 抗体）已进入临床试验阶段；

• aHUS 患者 C3 基因突变导致补体过度激活，检测 C3 水平可辅助诊断并指导依库珠单抗等靶向治疗。

（二）基础研究应用

1. 补体激活机制研究：

• 通过检测 C3 生成量，解析不同激活途径（经典、凝集素、替代）的贡献度及调控机制；

• 研究 C3 与其他补体成分（如 C5、Factor B）的相互作用网络。

2. 药物研发评价：

• 评估补体抑制剂（如 C3 转化酶抑制剂）的药效，监测治疗过程中 C3 水平的动态变化；

• 在抗 C3 抗体药物开发中，试剂盒可用于药代动力学和药效学研究。

3. 病理模型构建：

• 构建 C3 基因敲除小鼠模型，研究 C3 在免疫复合物清除、炎症调控中的作用；

• 模拟感染或自身免疫性疾病状态下，分析 C3 水平变化对疾病进程的影响。

五、质量控制与结果解读

（一）室内质量控制

1. 标准品验证：每次实验需包含标准品曲线，确保标准品吸光度值在试剂盒提供的范围内。

2. 阴性对照：使用试剂盒提供的阴性对照血清，其 OD 值应低于临界值（通常为 0.1）。

3. 重复性检测：对同一样本进行重复检测，确保 CV<10%，否则需重新实验。

（二）结果解读要点

1. 生理波动：C3 水平受年龄、性别、妊娠等因素影响，需结合临床背景综合分析。

2. 疾病特异性：C3 降低可见于 SLE、MPGN 等疾病，而升高可能提示急性炎症或感染。

3. 动态监测：单次检测结果需结合临床症状及其他指标（如 C4、CH50）进行动态评估。

六、总结与展望

1. Hycult Biotech. Human C3 ELISA Kit Product Manual. 2025.
2. Volanakis JE, Frank MM. The Human Complement System in Health and Disease. 2nd ed. New York: Marcel Dekker, 2001.
3. Roitt IM, Brostoff J, Male DK. Immunology. 8th ed. London: Churchill Livingstone, 2014.
4. Berger T V, et al. VEGF and PlGF receptor interactions. Trends Cell Biol. 2018.
5. Hayes R D, et al. PlGF in health and disease. Int J Mol Sci. 2018.