细胞衰老是指细胞停止分裂的现象。
细胞衰老可以由内部因素（氧化应激、DNA损伤等）和外部因素（毒素、紫外线等）诱导。衰老是一种细胞生长停滞的状态，细胞保持活性但不再分裂。衰老细胞表现出细胞体积增大、衰老相关β-半乳糖苷酶（β-Gal）表达增加、p53和p16活性增强，以及基因表达模式的改变。AkrivisBio的衰老检测试剂盒旨在检测β-Gal活性。β-Gal主要存在于衰老细胞中，但在正常表达β-Gal的细胞（如成熟巨噬细胞）中可能会出现假阳性。
艾美捷细胞衰老染色试剂盒：
货号：COS-0102
规格：可用于染色4片24孔、12孔或6孔培养板
样本类型：培养的贴壁细胞
适用物种：所有
检测方法：光学显微镜
检测类型：定性检测
应用：用于在光学显微镜下检测衰老细胞中的β-半乳糖苷酶（β-Gal）活性。
储存条件：4°C
运输温度：冰凝胶包运输
保质期：自发货之日起一年
检测原理：
1.细胞被固定以使其变得通透。
2.细胞经过一夜染色，以便在显微镜下观察到蓝色。
检测试剂：
-固定液：125毫升
-X-gal（150毫克）：冻干粉，绿色试剂瓶
-染色液：125毫升
-染色补充液：1.5毫升
用户自备材料：
-N,N-二甲基甲酰胺（DMF）
-磷酸盐缓冲液（PBS）
储存和处理：
-将试剂盒储存于-20°C。溶解X-gal后，将溶液储存于-20°C并避光。
-以下协议是为12孔板的每个孔设计的。如果使用不同规格的孔板，请相应调整体积（例如，对于6孔板，体积加倍；对于24孔板，体积减半）。
-准备PBS溶液（未提供），每孔3毫升。
-X-gal溶液：X-gal具有吸湿性。在打开瓶盖前，让其在室温下平衡30分钟。称取20毫克X-gal放入棕色或用铝箔包裹的试管中，加入1毫升N,N-二甲基甲酰胺，制备20倍浓缩液。未使用的X-gal溶液可在-20°C（避光）下储存1-2个月。始终使用聚丙烯或玻璃容器存放X-gal溶液，不要使用聚苯乙烯。
-固定液、染色液和染色补充液（100倍浓缩）可在4°C下储存。
-如果染色液或染色补充液中出现沉淀，将溶液加热至37°C以重新溶解沉淀。如果沉淀仍然存在，离心试管并使用上清液。
衰老检测步骤：
1.通过在孔边缘吸液移除培养基，用1毫升PBS洗涤细胞一次。
2.用0.5毫升固定液在室温下固定细胞10-15分钟。在细胞固定的同时准备染色液。根据要染色的孔数准备足够的溶液。对于每个孔，准备以下溶液：
-染色液：470微升
-染色补充液：5微升
-X-gal在DMF中的溶液：25微升
3.用1毫升PBS洗涤细胞两次。
4.向每个孔中加入0.5毫升染色液混合物。盖上孔板。在37°C下孵育过夜。
5.在显微镜下观察细胞蓝色的出现（放大倍数为40-400倍）。
6.对于长期保存染色后的孔板，移除染色液并加入70%甘油至细胞中。在4°C下保存。
示例：
X-gal染色的典型结果。
出处：Tominaga, T., Shimada, R., Okada, Y., Kawamata, T., & Kibayashi, K. (2019). 鼠脑创伤后大脑中衰老相关β-半乳糖苷酶染色。《PLOS ONE》，14(3)，e0213673。doi:10.1371/journal.pone.0213673
