髓过氧化物酶（Myeloperoxidase），一种氧化酶，在中性粒细胞中大量表达。当中性粒细胞被激活时，髓过氧化物酶（MPO）被释放到细胞外空间，在那里它催化从过氧化氢和氯离子形成次氯酸（HOCl）。次氯酸是一种非常强的氧化剂，能够杀死入侵的细菌、病毒和真菌。髓过氧化物酶的活性除了在宿主防御中的作用外，还具有代谢意义，因为它还可以氧化脂质、蛋白质和DNA，导致在慢性炎症状况（如动脉粥样硬化、慢性阻塞性肺病和神经退行性疾病）中的氧化损伤。AkrivisBio的髓过氧化物酶检测是一种简单敏感的方法，用于测量每孔低于0.05mU的酶活性。
艾美捷髓过氧化物酶活性测定试剂盒：
货号：MA-0135
孔数：100孔
样本类型：细胞裂解物、组织提取物、尿液、血清、其他生物液体
物种：所有物种
检测方法：比色法，OD 412纳米
检测类型：定量
应用：一种基于板的比色法检测，用于测量多种样本类型中髓过氧化物酶（MPO）的酶活性。
灵敏度：<0.05 mU/孔
储存条件：-20°C
运输温度：使用冰袋
髓过氧化物酶活性测定试剂盒检测组分：
-检测缓冲液25毫升WMMA-0135-A
-DTNB50微升红色MA-0135-B
-TCEP50微升透明MA-0135-C
-过氧化氢50微升蓝色MA-0135-D
-停止试剂（过氧化氢酶）冻干绿色MA-0135-E
-髓过氧化物酶阳性对照冻干紫色MA-0135-F
髓过氧化物酶活性测定试剂盒检测原理：
1.髓过氧化物酶从过氧化氢和氯离子产生次氯酸（HOCl）
2.次氯酸与牛磺酸反应形成牛磺酸氯胺
3.牛磺酸氯胺与TNB反应，TNB是DTNB的还原形式，Ellman试剂，使颜色褪去，导致吸光度下降。
储存和处理：
使用前将试剂盒储存在-20°C。使用前让检测缓冲液升温至室温。打开前短暂离心小瓶。
-检测缓冲液：按提供使用。储存在4°C。
-DTNB试剂：按提供使用。储存在4°C
-TCEP：按提供使用。储存在4°C
-过氧化氢：按提供使用。储存在4°C。
-停止试剂（过氧化氢酶）：用200微升的DIH2O重悬。储存在-20°C。
-髓过氧化物酶阳性对照：用100微升检测缓冲液重悬。储存在-20°C。
注意：如果检测将在一段时间内多次使用，请将酶（停止试剂和阳性对照）分装成方便的份量，并储存在-20°C以避免重复冻融循环。
检测方案：
1.工作溶液：
TNB试剂：为标准孔制作TNB试剂。TNB很容易氧化为DTNB，因此需要时再准备，即在要使用的当天。取2微升DTNB，2微升TCEP和196微升检测缓冲液，混合均匀并放在冰上。丢弃任何未使用的TNB试剂。
过氧化氢：为准备工作溶液，将5微升过氧化氢转移到300微升的DIH2O中。在立即使用前制作工作溶液。丢弃任何未使用的部分。
2.标准曲线：将0–10–20–30–40–50微升TNB试剂转移到96孔板上的一系列孔中。通过分别向孔中添加150、140、130、120、110和100微升的检测缓冲液，使所有孔的体积达到150微升，得到0–10–20–30–40–50纳摩尔的TNB。
3.在412纳米处读取标准曲线值。
4.样本准备：
将组织（10毫克）或细胞（10^6）在100微升的检测缓冲液中匀浆，以16,000Xg离心5分钟，以去除颗粒/细胞碎片。将清澈的上清液转移到新鲜试管中。将5-50微升转移到96孔板中。用检测缓冲液稀释血清并转移到孔中。对于中性粒细胞：取2毫升血液，使用10倍体积的红细胞裂解缓冲液（150mM氯化铵，10mM碳酸氢钠，0.1mMEDTA）裂解；在室温下孵育10分钟。以400xg离心5分钟；小心移除上清液。用1毫升1XPBS洗涤沉淀物，并以400xg离心5分钟，然后小心移除上清液。使用200微升检测缓冲液裂解沉淀物；在冰上放置10分钟。然后以16,000xg离心5分钟以去除颗粒。将清澈的上清液转移到新鲜试管中。将最多10微升的裂解液以双份转移到96孔板中，使用一个孔作为背景对照。用检测缓冲液调整所有样本和背景孔的体积至50微升。
5.阳性对照：将5微升重悬的髓过氧化物酶阳性对照转移到可选的阳性对照孔中。用检测缓冲液调整孔的体积至50微升。
6.启动反应：每个孔将需要50微升的反应混合物。向每个样本和阳性对照孔中添加50微升的反应混合物。向背景对照孔中添加50微升的背景对照混合物。混合均匀。不要向标准孔中添加反应混合物。
7.在25°C下孵育板30分钟。然后向所有样本、标准、背景对照和阳性对照孔中添加2微升停止试剂。混合并在10分钟内孵育板以停止反应。理想情况下，样本将在检测结束时给出标准曲线范围的50-90%的信号。如果30分钟后信号太低，请重复更长时间的检测。如果信号大于标准曲线范围的90%，请用较少或稀释的样本重新运行检测。如果酶活性低，2或3小时的运行时间是可以接受的。在此孵育阶段，准备TNB试剂并保持在冰上。准备足够的试剂以满足包括样本、背景对照和阳性对照在内的总孔数。每个孔将需要50微升。向每个样本、背景对照和阳性对照孔中添加50微升TNB试剂。
8.测量：添加TNB试剂后，等待5-10分钟，让TNB褪色，然后在412纳米处读取。阳性对照和样本将显示出与酶存在量成比例的颜色减少。这可以通过简单地计算OD（412纳米）背景-OD（412纳米）样本来计算。接近标准范围高端的值是可疑的，那些样本应该稀释并重新运行。
9.典型结果：
10.计算：从所有标准读数中减去0标准读数。绘制TNB标准曲线。确定标准曲线的斜率。这定义了溶液中OD/纳摩尔TNB。从配对样本吸光度值中减去背景对照孔值。这个差异对应于反应过程中消耗的TNB。将这个背景校正的吸光度除以标准曲线的斜率，得到孔中消耗的纳摩尔TNB。除以反应时间得到纳摩尔/分钟（孔中的mU酶活性）。要转换回原始样本中的酶活性：
A.将孔中的mU除以添加到孔中的样本微升数=mU/微升样本
B.将mU/微升样本乘以回收的上清液总体积=样本中的总mU酶活性
C.将样本中的总mU酶活性除以处理的原始样本毫克数（或细胞数或血液毫升数等）
